重点:cDNA基因文库的构建及目的基因分离,利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因,基 因组文库的构建。 难点:cDNA基因文库的构建及目的基因分离,筛选目的基因片段的差别杂交及减法杂交技 术 教学建议 1.cDNA基因文库的构建既是重点又是难点,所以在讲此内容之前,应对与此有关的内容, 如:噬菌体的包装及转染、质粒的转化、基因片段与载体的连接等内容作概括复习 2.在对聚合酶链式反应(PCR)初步理解的基础上,进一步学习利用PCR扩增目的基因,以 便加深对聚合酶链式反应技术的理解和应用。 第五章目的基因导入受体细胞 (一)教学目的 学习和了解重组体分子导入受体细胞的途径(如转染、转导、显微注射、和电穿孔等多 种不同的方式),以及筛选和检测重组体细胞的方法。 (二)教学内容 第一节受体细胞 第二节重组DNA分子转入原核生物 1.重组质粒DNA分子转化大肠杆菌 2.重组λ噬菌体DNA分子转导大肠杆菌 3.受体细胞的选择 4.重组DNA分子转入真核细胞 第三节重组子的筛选 1.遗传表型直接筛选法 2.依赖于重组子结构特征分析的筛选法 3.核酸分子杂交检测法 4.免疫化学检测法 5.转译筛选法 (三)教学要求 1.理解受体细胞、转化、转导、感受态细胞、转化率、体外包装等相关概念。 2.掌握感受态细胞的制备方法。6 重点：cDNA 基因文库的构建及目的基因分离，利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因，基 因组文库的构建。 难点：cDNA 基因文库的构建及目的基因分离，筛选目的基因片段的差别杂交及减法杂交技 术。 教学建议： 1.cDNA 基因文库的构建既是重点又是难点，所以在讲此内容之前，应对与此有关的内容， 如：噬菌体的包装及转染、质粒的转化、基因片段与载体的连接等内容作概括复习。 2.在对聚合酶链式反应（PCR）初步理解的基础上，进一步学习利用 PCR 扩增目的基因，以 便加深对聚合酶链式反应技术的理解和应用。 第五章 目的基因导入受体细胞 （一）教学目的 学习和了解重组体分子导入受体细胞的途径（如转染、转导、显微注射、和电穿孔等多 种不同的方式），以及筛选和检测重组体细胞的方法。 （二）教学内容 第一节 受体细胞 第二节 重组 DNA 分子转入原核生物 1.重组质粒 DNA 分子转化大肠杆菌 2.重组 λ 噬菌体 DNA 分子转导大肠杆菌 3.受体细胞的选择 4.重组 DNA 分子转入真核细胞 第三节 重组子的筛选 1.遗传表型直接筛选法 2.依赖于重组子结构特征分析的筛选法 3.核酸分子杂交检测法 4.免疫化学检测法 5.转译筛选法 （三）教学要求 1.理解受体细胞、转化、转导、感受态细胞、转化率、体外包装等相关概念。 2.掌握感受态细胞的制备方法