(1)精密称取0.20-2.00g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20mL液体样品(相当于 氮30-40mg),小心移入已干燥的s0omL定氮瓶中,加入0.5g硫酸铜,10g硫酸钾及20nL 硫酸,稍摇匀后,于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°斜支于有小圆孔的石棉网上,小心加 热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体沸腾(微沸)。至 液体呈蓝色澄清透明后,再继续加热0.5h,放冷,小心加入200m水,再放冷,连接已 准备好的蒸馏装置上,塞紧瓶口,冷凝管下端插入接收瓶液面下,接收瓶内盛有(20g/L), 硼酸溶液50mL及2-3滴混合指示液。 (2)放松节流夹,通过漏斗倒入 内容物转为深蓝色或产生褐色沉淀, 再倒入 (400g/L)氢氧化钠溶液,并振摇定氮瓶,至 00nL水,夹紧节流夹,加热蒸馏,至氨被完 全蒸出。停止加热前,先将接收瓶放下少许,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min,然 后停止加热,并用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下接收瓶 (3)以硫酸或盐酸标准溶液(0.0500moLL)滴定至灰色为终点。同时做试剂空白试验 5计算 H-V2×c×0.014 X F×100 …………(3-10) 式中X一样品中蛋白质的含量,g/100g(g/100mL) V1-样品消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,mL V2-试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,mL: c-°硫酸或盐酸标准溶液的浓度,moLL; 0.014-100mL硫酸[c(l/2H2SO=1.000mL/或盐酸c(HCI)=1.000m0L/标准溶液 中相当的氮的质量,g m-样品的质量(或体积),g或mL F--氮换算为蛋白质的系数 6说明 本法为直接蒸馏法,蒸馏终点的确定对测定样品含量的准确程度影响很大,一般样品 馏出液超过250mL,氮可完全蒸出,注意蒸馏时勿烧干,（1）精密称取 0.20—2.00g 固体样品或 2-5g 半固体样品或吸取 10-20mL 液体样品(相当于 氮 30-40mg)，小心移入已干燥的 500mL 定氮瓶中，加入 0.5g 硫酸铜，10g 硫酸钾及 20mL 硫酸，稍摇匀后，于瓶口放一小漏斗，将瓶以 45°斜支于有小圆孔的石棉网上，小心加 热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体沸腾（微沸）。至 液体呈蓝色澄清透明后，再继续加热 0.5h，放冷，小心加入 200mL 水，再放冷，连接已 准备好的蒸馏装置上，塞紧瓶口，冷凝管下端插入接收瓶液面下，接收瓶内盛有（20g/L）， 硼酸溶液 50mL 及 2-3 滴混合指示液。 （2）放松节流夹，通过漏斗倒入 70-80mL（400g/L）氢氧化钠溶液，并振摇定氮瓶，至 内容物转为深蓝色或产生褐色沉淀，再倒入 100mL 水，夹紧节流夹，加热蒸馏，至氨被完 全蒸出。停止加热前，先将接收瓶放下少许，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏 1min，然 后停止加热，并用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下接收瓶。 （3）以硫酸或盐酸标准溶液（0.0500moL/L）滴定至灰色为终点。同时做试剂空白试验。 5 计算 100 1 2 0.014   −   = F m V V c X ………………（3-10） 式中 X---样品中蛋白质的含量，g/100g(g/100mL); V1---样品消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，mL; V2---试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，mL; c---硫酸或盐酸标准溶液的浓度，moL/L; 0.014---1.00mL 硫酸[c(1/2H2SO4)=1.000moL/L]或盐酸[c(HCI)=1.000moL/L]标准溶液 中相当的氮的质量，g; m---样品的质量(或体积)，g 或 mL; F---氮换算为蛋白质的系数。 6 说明 本法为直接蒸馏法，蒸馏终点的确定对测定样品含量的准确程度影响很大，一般样品 馏出液超过 250mL，氮可完全蒸出，注意蒸馏时勿烧干