950175 在大肠杆菌中由1ac启动子调控表达Fab。非常相 花生属( Arachis L.)多年生野生种组织培养研究似的VL蛋白序列导致两个相应基因同时合成。用 初报[中]/吴爱忠…/上海农学院学报1994,12C-1结构城取代C-k区导致两种功能性Fab和周 (8).-210~214 质可溶性轻链的量增高。C-入-1结构域的序列可通 取顶芽、下胚轴、叶片、带叶腋茎段为外植过增加跨细胞膜的转运或通过减少局质内含体的形 体,接种到不同的选择培养基中培养,观察叶圆成而增加功熊性轻链的产量。{孙雷心) 片8周后形成淡黄色愈伤组织,但未能分化出幼95u178 芽,上胚轴还渐褐化且干枯死。只有顶芽能继续分瓦組覆白生产专,英1/ Unilever/EP-587-312 化生长丛生芽,频率为98%,茎段嫰枝在MS+11,08.92-92GB-016983(16,0394)09,0893As NAA2+BA,上分化出幼劳,正背幼在1/2MS+33EP-306259,94-085209/11(24页)[译自DBA, NAA1上,2后唧诱导昌不定银。选用i/2Ms1994,13(10),94-05667] +NAA1培养基为生板培养基。组培苗经炼苗后,下述步骤生产重组蛋白:利用PCR和寡 移至盆中,长发育成正常的花生小植株。(孙国风)DNA引物对克隆一段序列,得到带有由引物限定 终止部分的克隆,培养转化菌株使之表达蛋白;用 动物细胞培养及单克隆抗体 与至少3~6个引物特异性氨基酸亲和的结合剂测 定或提纯该蛋白。用此法可一起提纯多种重组蛋 白。该蛋白可为抗体重链或轻链可变区。可用下述 经遗传免疫产生单克隆抗体[英]/ Barry,M,A.方法生产朕合抗体:克隆一抗体某链的片段,同时 …!/ BioTechniques,-1994,16(4k),616~用编码第二链的片段转化同一菌株;培养该菌;纯 620[译自DBA,1994,13(10),94-05662] 化前使两链结合。结合剂可为抗体或片段。(孙雷心 研究了利用遗传免疫(G1)生产人生长激素950179 (hST)特异性单抗的情况。将质粒 PlFhGH4的用粒子轰击法将基因导人哺乳类细胞[英]/ Heiser hST基因组序列插入哺乳动物表达载体质粒 pcDN M,C,/Anal, Biochem,-1994,217(2).185 Al,构成CMV-hST。用手持式微弹装置每2周~196译自DBA,199:,13(10),94-05885 次给雌性BALB/c小鼠免疫接种25gCMⅤ 以COS-7和CHO细胞为模型系统,研究了用 hST(包被了DNA的金粒),接种部位为两耳。金微粒将基因导入哺乳类细胞的效率。影响转化效 第三次免疫后第4天处死小鼠制备杂交瘤。将脾细率最重要的参数是粒子大小,距靶远近和室真空 胞与SP2小鼠骨髓瘤细胞融合。阳性杂交瘤产生的度。细胞培养盘的大小也影响转化效率。而氦气 抗体,50%只识别天然蛋白、10%只识别变性蛋压、缝隙大小和巨大载体的迁移距离对转化效率影 白、40%可识別两者。当致免疫蛋白难以纯化或响不大。与其它转化技术比较,用粒子轰击法达到 其结构易经提纯损坏时,可用GI生产特异性单抗。成功地瞬吋或稳定表达所需的DNA量和细胞数目 可用GI法向动物体中同时输入多基因。(孙雷心)均较少。还转化了几种小鼠细胞系,这些细胞系 950177 是以前不曾转化或用其它方法转化水平极低的,这 c--C-k结构域转变对Fab活性的影响及其在大肠些细胞有,原脂肪细胞BMs-2、巨噬细胞J774和 杆菌中的产量英]/ MacKenzie,C.R,…!/Bio/转化的原-B-淋巴细胞(38B9和702/3)细胞系。 Technology.-1994,12(4),390~395译自该法比电穿孔、 lipofection和DEAE-葡聚糖法 得到的瞬时表达水平高。(王颖) 利用合成杂合基囚及恒定结构域搅乱在大肠杆950180 菌中构建并功能性表达编码两种抗碳水化合物Fab用HPLc监测杂交瘤培养过程中的蛋白[英/Gail- 的基因,这两种Fab分别特异于布鲁氏杆菌细胞表lard,I…/ Biotechnol.Tech.-1994,8(4 面多糖和人血A-组决定子。从两个区组组装V ~220[译自DBA,1994,13(10),94-05886] 序列,得到5′-端为 EcoRI位点、3′端为 BSpEI位点 建立了一种层析法用以检测杂交瘤培养上清液 的片段。两抗体均相同的C=K恒定结构域序列经组中的蛋白成份。在一培养基中,用含4Ag/m1胰岛 装成5′-端为 BspEI、3′-端为HindⅣ位惠的片 素、15g/m1转铁蛋白和00/m1牛血清白蛋白 91994-2008ChinaAcademicjOurnalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net