3.分子杂交的一般程序 1)DNA和RNA的杂交 制备DNA或RNA样品与固定基质结合80℃真空固定→ 预杂交→加入标记探针杂交洗涤放射自显影或显色反应。 2)蛋白质的免疫分析 制备蛋白质样品→与固定基质结合常温空气中固定→封闭 剂封闭→一抗反应一洗涤二抗-酶偶联物反应洗涤显色反 应(EIA) 或→一抗放射标记物洗涤→放射自显影(RIA 杂交样品膜的制备 1.固定基质的种类与特性 1)硝酸纤维素滤膜( Nitrocellulose filter,NCF) 可与三类大分子的结合,其机理不清楚,可能为被动吸附。 NCF不能结合小分子DNA,RNA和蛋白质(<20,0003. 分子杂交的一般程序 1) DNA和RNA的杂交 制备DNA或RNA样品→与固定基质结合→80℃真空固定→ 预杂交→加入标记探针杂交→洗涤→放射自显影或显色反应。 2）蛋白质的免疫分析 制备蛋白质样品→与固定基质结合→常温空气中固定→封闭 剂封闭→一抗反应→洗涤→二抗-酶偶联物反应→洗涤→显色反 应（EIA） 或 → 一抗放射标记物→洗涤→放射自显影（RIA） 二. 杂交样品膜的制备 1. 固定基质的种类与特性 1）硝酸纤维素滤膜(Nitrocellulose filter, NCF) 可与三类大分子的结合，其机理不清楚，可能为被动吸附。 NCF不能结合小分子DNA，RNA和蛋白质（<20,000）