2.50 1.50 22.50 三、实验器材 1、药品琼脂,10%HCL,10%NaOH,牛肉膏蛋白胨培养基的配方药品; 2、材料具刻度100毫升塘瓷盅或小铝锅,电子称,10×200mm试管,量筒,小烧杯, 玻璃棒,骨匙,皿试纸,分装漏斗,试管盒,纱布,棉花,报纸,麻绳,标签,培养皿。 3、设备高压蒸汽灭菌锅、烘箱、冰箱、电炉等 四、实验步骤 1、称取药品放在大烧杯中,加入蒸馏水用玻璃棒搅拌并加热溶化,等药品溶解后用pH试 纸调节pH至7476,如有沉淀应过滤后分装,每支试管约加入9ml。每组分装30支, 加上棉塞,包上牛皮纸,准备灭菌 装入试管中的量不宜超过试管高度的1/5,装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为 限。在分装过程中,应注意勿使培养基沾污管口或瓶口、以免弄湿棉塞,造成污染 2、无菌水准备 在试管或瓶内先盛以适量的蒸馏水〔或生理盐水O.85%NaCl),盖好棉塞,包上牛皮 纸使其灭菌后,其水量恰为9ml。每组准备10支与牛肉膏蛋白胨培养基可放在同一试管架 上,以一大张牛皮纸包扎写上姓名。准备灭菌。 3、高压灭菌 手提式高压蒸汽灭菌锅的使用操作步骤: (1)首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 (2)放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭 菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞, (3)加盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时 旋紧相对的两个螺栓,使螺栓松紧一致,勿使漏气。 (4)用电炉或煤气加热,并同时打开排气阀,使水沸腾以排除涡内的冷空气。待冷空气 完全排尽后,关上排气阀,让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需 压力时,控制热源,维持压力至所需时间。本实验用1.05kg/cm2,121.3℃,20分钟灭菌。 (5)灭菌所需时间到后,切断电源或关闭煤气,让灭菌锅内温度自然下降,当压力表的 压力降至0时,打开排气阀,旋松螺栓,打开盖子,取出灭菌物品。如果压力未降到0时, 打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶 口或试管口,造成棉塞沾染培养基而发生污染。 (6)将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时,经检查若无杂菌生长,即可待用。 五、思考题 1、棉塞的作用?2.50 3.00 1.50 2.00 22.50 30.00 128.0 134.5 三、实验器材 1、 药品 琼脂，10％HCL,10% NaOH，牛肉膏蛋白胨培养基的配方药品； 2、 材料 具刻度 1000 毫升塘瓷盅或小铝锅，电子称，10×200mm 试管，量筒，小烧杯， 玻璃棒，骨匙，pH 试纸，分装漏斗，试管盒，纱布，棉花，报纸，麻绳，标签，培养皿。 3、 设备 高压蒸汽灭菌锅、烘箱、冰箱、电炉等 四、实验步骤 1、 称取药品放在大烧杯中，加入蒸馏水用玻璃棒搅拌并加热溶化，等药品溶解后用 pH 试 纸调节 p H 至 7.4-7.6，如有沉淀应过滤后分装，每支试管约加入 9ml。每组分装 30 支， 加上棉塞，包上牛皮纸，准备灭菌。 装入试管中的量不宜超过试管高度的 1/5，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为 限。在分装过程中，应注意勿使培养基沾污管口或瓶口、以免弄湿棉塞，造成污染。 2、无菌水准备 在试管或瓶内先盛以适量的蒸馏水〔或生理盐水 O．85％NaCl)，盖好棉塞，包上牛皮 纸使其灭菌后，其水量恰为 9ml。 每组准备 10 支与牛肉膏蛋白胨培养基可放在同一试管架 上，以一大张牛皮纸包扎写上姓名。准备灭菌。 3、高压灭菌 手提式高压蒸汽灭菌锅的使用操作步骤： （1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 （2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭 菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 （3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时 旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 （4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除涡内的冷空气。待冷空气 完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需 压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1.05kg/cm2，121.3℃，20 分钟灭菌。 （5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的 压力降至 0 时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到 0 时， 打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶 口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 （6）将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养 24 小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。 五、思考题 1、棉塞的作用？