实验二菜花（花椰莱）中核酸的分离和鉴定 一、目的 初步掌握从菜花中分离核酸的方法，和RNA、DNA的定性检定。 二、原理 用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆，以除去酸溶性 小分子等物质。再用有机溶剂，如乙醇、乙醇等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物质。 最后用浓盐溶液(10%氯化钠溶液)和0.5摩尔/升高氯酸(70℃)分别提取DNA 和RNA,再进行定性检定。 由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定 范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比，因此可用定糖法来定性定量 测定核酸。 l.核糖的测定：测定核糖的常用方法是苔黑酚（即3,5-二羟甲苯）法(Oreinol 反应)。当含有核糖的RNA与浓盐酸及3,5-二羟甲苯在沸水浴中加热1(10一20分 钟后，有绿色物产生，这是因为RNA脱瞟吟后的核糖与酸作用生成糠醛，后者再 与3,5二羟甲苯作用产生绿色物质。 CH, RNA十浓盐酸十HG 100C绿色复合物 -OH FeCLa DNA、蛋白质和粘多糖等物质对测定有干扰作用。 2,脱氧核糖的测定：测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脱氧核糖的 DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热I0分钟后，产生蓝色。这是因为DNA 嘌吟核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成。羟基6-酮基成醛，它再和二苯胺作用产生蓝 色物质。 DNA+少量浓H,SO, 100C蓝色物 此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。 上述两种定糖的方法准确性较差，但快速简便，能鉴别DNA与RNA,是检 定核酸、核昔酸的常用方法。 三、器材 1.恒温水浴 2.电炉。 3.离心机。 4.布氏漏斗装置。 5.吸管。 6.烧杯。实验二 菜花（花椰莱）中核酸的分离和鉴定 一、目 的 初步掌握从菜花中分离核酸的方法，和 RNA、DNA 的定性检定。 二、原 理 用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆，以除去酸溶性 小分子等物质。再用有机溶剂，如乙醇、乙醇等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物质。 最后用浓盐溶液（10％氯化钠溶液）和 0.5 摩尔／升高氯酸（70℃）分别提取 DNA 和 RNA，再进行定性检定。 由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定 范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比，因此可用定糖法来定性定量 测定核酸。 1． 核糖的测定：测定核糖的常用方法是苔黑酚（即 3,5-二羟甲苯）法（Oreinol 反应）。当含有核糖的 RNA 与浓盐酸及 3,5-二羟甲苯在沸水浴中加热 l（10－20 分 钟后，有绿色物产生，这是因为 RNA 脱瞟吟后的核糖与酸作用生成糠醛，后者再 与 3,5-二羟甲苯作用产生绿色物质。 DNA、蛋白质和粘多糖等物质对测定有干扰作用。 2．脱氧核糖的测定：测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脱氧核糖的 DNA 在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热 10 分钟后，产生蓝色。这是因为 DNA 嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-6-酮基戍醛，它再和二苯胺作用产生蓝 色物质。 此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。 上述两种定糖的方法准确性较差，但快速简便，能鉴别 DNA 与 RNA，是检 定核酸、核昔酸的常用方法。 三、器 材 l．恒温水浴。 2．电炉。 3．离心机。 4．布氏漏斗装置。 5．吸管。 6．烧杯