质、核酸、激素等丰富的营养物质,对促进细胞生长繁殖,粘附及中和某些物质的毒性起着 定的作用。最常用的是小牛血清,胎牛血清。人血清用于一些人细胞系。大多数动物细胞 培养必须在培养基中添加血清,但在许多情况下,细胞可在无血清条件下维持和增殖。 目前合成培养基的配方都已相对固定,并形成配制好的干粉型商品。其成分趋于简单化, 以能维持细胞生长的最低需求,而去除了不必要的成份。同时为适应某些特殊培养的需要补 加一些新的成分,如培养杂交瘤细胞时采用DMEM培养基需补加丙酮酸钠和2-硫基乙醇:为 增加细胞转化和DNA合成,有时补加植物血凝素(PHA)等。这些变化需根据实验和细胞的具 体要求而定。 2、培养基制备以及制备过程中应考虑的因素 虽然各种培养基的组成各有不同、但形成商品化的干粉型培养基的配制方法却大同小 异。绝大多数合成培养基的生产都己标准化、商品化。较为常用的培养基市场上很容易购得 这种干粉型培养基性质稳定,便于储存、运输、价格便宜,给使用和配制合成培养基带来很 大方便。一般的特殊需求也多可在现有合成培养基基础上补加或调整某些成份予以满足。以 往实验室自购各个组份,称量后再按一定顺序进行溶解配制的老方法,一方面需购置大量各 种各样的成份,而且每种成份用量很少,很难控制和统一;另一方面要精确称量,顺序溶解, 步骤繁琐,质量难以保证。除了因特殊需要而专门配制一些特殊培养基外,大部分已不再使 用 在制备培养基时,通常要考虑以下因素: (1)p值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长最佳p值 变化很小,但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4~7.7最好,转化细胞以pH=7.0~7.4更合 适。据报道,上皮细胞以p=5.5合适。为确定最佳pH值,最好做一个简单的生长实验或特 殊功能分析 酚红常用作指示剂,pH=7.4呈红色,pH=7.0变橙色,pH=6.5变黄色,而pH=7.6呈红 色中略带蓝色,p=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性,因而必须用无菌平衡 盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样,放在与制备培养基相同的瓶子中 ()缓冲能力碳酸盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其 他缓冲系统用得多。在生理p值条件下的缓冲能力差。 (3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升 高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。 (4)粘度培养基的粘度主要受血清含量的影响,在多数情况下,对细胞生长没有什么 影响。在搅拌条件下,用羧甲基纤维素増加培养基的粘度,可减轻细胞损害。这对在低血清 浓度或无血清下条件下培养细胞显得尤为重要。 三、动物细胞培养方法和环境要求 (一)动物细胞培养的方法 动物细胞的体外培养有两种类型,一类是贴壁依赖性细胞,大多数动物细胞,包括非淋 巴组织的细胞和许多异倍体体系的细胞部属于这一类型。这一类需采用贴壁培养。另一类是 非贴壁依赖性细胞,来源于血液、淋巴组织的细胞,许多肿瘤细胞(包括杂交瘤细胞)和某些 转化细胞属于这一类型。这一类可采用类似微生物培养的方法进行悬浮培养。 所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷 的固体或半固体的表面上才能正常生长,并最终在附着表面扩展成单层。其基本操作过程是 先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法 分散成细胞悬液,经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加有适宜培养液的培养皿(瓶、板) 中,再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良好且易于观察,适于实验室质、核酸、激素等丰富的营养物质，对促进细胞生长繁殖，粘附及中和某些物质的毒性起着 一定的作用。最常用的是小牛血清，胎牛血清。人血清用于一些人细胞系。大多数动物细胞 培养必须在培养基中添加血清，但在许多情况下，细胞可在无血清条件下维持和增殖。 目前合成培养基的配方都已相对固定，并形成配制好的干粉型商品。其成分趋于简单化， 以能维持细胞生长的最低需求，而去除了不必要的成份。同时为适应某些特殊培养的需要补 加—些新的成分，如培养杂交瘤细胞时采用 DMEM 培养基需补加丙酮酸钠和 2-硫基乙醇；为 增加细胞转化和 DNA 合成，有时补加植物血凝素(PHA)等。这些变化需根据实验和细胞的具 体要求而定。 2、培养基制备以及制备过程中应考虑的因素 虽然各种培养基的组成各有不同、但形成商品化的干粉型培养基的配制方法却大同小 异。绝大多数合成培养基的生产都己标准化、商品化。较为常用的培养基市场上很容易购得。 这种干粉型培养基性质稳定，便于储存、运输、价格便宜，给使用和配制合成培养基带来很 大方便。一般的特殊需求也多可在现有合成培养基基础上补加或调整某些成份予以满足。以 往实验室自购各个组份，称量后再按一定顺序进行溶解配制的老方法，一方面需购置大量各 种各样的成份，而且每种成份用量很少，很难控制和统一；另一方面要精确称量，顺序溶解， 步骤繁琐，质量难以保证。除了因特殊需要而专门配制一些特殊培养基外，大部分已不再使 用。 在制备培养基时，通常要考虑以下因素： (1)pH 值 多数细胞系在 pH=7.4 下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长最佳 pH 值 变化很小，但一些正常的成纤维细胞系以 pH=7.4～7.7 最好，转化细胞以 pH=7.0～7.4 更合 适。据报道，上皮细胞以 pH=5.5 合适。为确定最佳 pH 值，最好做一个简单的生长实验或特 殊功能分析。 酚红常用作指示剂，pH=7.4 呈红色，pH=7.0 变橙色，pH=6.5 变黄色，而 pH=7.6 呈红 色中略带蓝色，pH=7.8 呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性，因而必须用无菌平衡 盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样，放在与制备培养基相同的瓶子中。 (2)缓冲能力 碳酸盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用，因此比其 他缓冲系统用得多。在生理 pH 值条件下的缓冲能力差。 (3)渗透压 多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围，一般常用冰点降低或蒸汽压升 高测定。如果自己配培养基，可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。 (4)粘度 培养基的粘度主要受血清含量的影响，在多数情况下，对细胞生长没有什么 影响。在搅拌条件下，用羧甲基纤维素增加培养基的粘度，可减轻细胞损害。这对在低血清 浓度或无血清下条件下培养细胞显得尤为重要。 三、动物细胞培养方法和环境要求 （一）动物细胞培养的方法 动物细胞的体外培养有两种类型，一类是贴壁依赖性细胞，大多数动物细胞，包括非淋 巴组织的细胞和许多异倍体体系的细胞部属于这一类型。这一类需采用贴壁培养。另一类是 非贴壁依赖性细胞，来源于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞(包括杂交瘤细胞)和某些 转化细胞属于这一类型。这—类可采用类似微生物培养的方法进行悬浮培养。 所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷 的固体或半固体的表面上才能正常生长，并最终在附着表面扩展成单层。其基本操作过程是： 先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法 分散成细胞悬液，经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加有适宜培养液的培养皿(瓶、板) 中，再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良好且易于观察，适于实验室