(6)天平 3.药品 (1)0.1 mol/L Tris-HCI缓冲液(pH8.5) 取12.114g三羟甲基氨基甲烷(Tris),加水稀释,用HCl调pH8.5后定容l000mL (2)0.2mo/L磷酸缓冲液(pH60) 贮备液A:0.2 mol/L Nah2PO溶液(27.8gNaH2PO4·H2O配成1000mL) 贮备液B:0.2mol/ L NazHPO4溶液(53.65 NachO4·7H2O或71.7 g NazHPC4·12H2O 配成1000mL)。 分别取贮备液A87.7mL与贮备液B123mL充分混匀并稀释至200mL。 (3)反应混合液 取0.2moL磷酸缓冲液(pH60)50mL,过氧化氢0.028mL,愈创木酚0.019mL混合 四、操作步骤 酶液提取:取不同水稻根系(根系表面水分吸干)1g,剪碎置于研钵中,加5mL0.1 mol/L Tris-HCI缓冲液(pH8.5),研磨成匀浆,以400r/min离心5min,倾出上清液,必要 时残渣再用5mL缓冲液提取一次,合并两次上清液,保存在冰箱(或冷处)备用。 2.取光径lcm比色杯2个,向其中之一加入上述酶液lmL(如酶活性过高可稀释之), 再加入反应混合液3mL,立即开启秒表记录时间:而向另一比色杯中加入02molL磷酸缓 冲液(pH6.0),作为零对照。用分光光度计在470m波长下测定反应5min时的光密度值 五、结果计算 以每分钟光密度变化(以每分钟 ODum变化001为1个活力单位)表示酶活性大小,即 △OD47m 过氧化物酶活力= n. mg(FW) 六、附注 1.酶的提取纯化需在低温下进行。（6）天平 3．药品 （1）0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.5） 取 12.114g 三羟甲基氨基甲烷（Tris），加水稀释，用 HCl 调 pH8.5 后定容 1 000mL。 （2）0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0） 贮备液 A：0.2 mol/L NaH2PO4 溶液（27.8g NaH2PO4·H2O 配成 1 000mL）。 贮备液 B：0.2 mol/L Na2HPO4 溶液（53.65g Na2HPO4·7H2O 或 71.7g Na2HPO4·12H2O 配成 1 000mL）。 分别取贮备液 A 87.7mL 与贮备液 B 12.3mL 充分混匀并稀释至 200mL。 （3）反应混合液 取 0.2 mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）50mL，过氧化氢 0.028mL，愈创木酚 0.019mL 混合。 四、操作步骤 1．酶液提取：取不同水稻根系（根系表面水分吸干）1g，剪碎置于研钵中，加 5mL 0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.5），研磨成匀浆，以 4 000r/min 离心 5min，倾出上清液，必要 时残渣再用 5mL 缓冲液提取一次，合并两次上清液，保存在冰箱（或冷处）备用。 2．取光径 1cm 比色杯 2 个，向其中之一加入上述酶液 1mL（如酶活性过高可稀释之）， 再加入反应混合液 3mL，立即开启秒表记录时间；而向另一比色杯中加入 0.2 mol/L 磷酸缓 冲液（pH6.0），作为零对照。用分光光度计在 470nm 波长下测定反应 5min 时的光密度值。 五、结果计算 以每分钟光密度变化（以每分钟OD470nm变化0.01 为1 个活力单位）表示酶活性大小，即 过氧化物酶活力 = △OD470nm min·mg（FW） 六、附注 1．酶的提取纯化需在低温下进行