洋与湖沼 3卷 多肽,有待于进一步深入研究 另外关于GHⅴ的基因克隆与序列分析方面的研究工作才刚刚起步,wang等 (1994)在国内率先克隆了BCHV基因组的M和S,片断,并对已克隆的病毒基因组片段进 行了序列分析,进一步的工作正在进行中 5草鱼出血病病毒基因组的转录和翻译 关于GHⅤ在宿主细胞内的复制过程,特别是基因组的转录和翻译还知之甚少。近 年来的研究表明:GCHV核心内含有RNA转录酶,可催化dRNA中的一条链转录合成 mRNA,该酶在28℃时的反应活性最高且能保持较长的时间(柯丽华等.1992黄倢等 1992)。在体外转录条件下,RNA转录酶需要低离子浓度活化其机制可能是低离子浓 度溶液处理,使病毒粒子外层衣壳子粒松散脱落,暴露出核心上的RNA转录酶活性基 因,更利于催化 dsrna转录合成mRNA,GCIV转录酶的上述特征、有别于呼肠孤病毒 科的其它成员,这是由于它们各自所适应不同的宿主的结构(黄倢等,192:张保焰等 1993) 张保焰等(1993)研究还发现,GCHV基因组的体内转录分为早晚两期,早期转录是在病毒 感染细胞后4h开始的,8h后开始晚期转录。转录产物mRNA的大小和数目大体上与病毒基因 组的一致。早期转录是RNA转录酶以初始感染的病毒 dsRNA为模板进行的转录,晚期转录则 是以子代病毒基因组为模板进行的转录、二者没有本质上的差别,只是转录模板的来源不同。 GCHV基因组的转录和翻译过程都是在宿主细胞质中完成的,病毒核酸可穿过核心上的中空 钉状物释放到宿主细胞的细胞质中,通过对人工释放病毒基因组的电子显微镜观察,往往可 以看到三种情形,RNA双链一端与核心衣壳相连,构战类似反应核心的形态;有些RNA双链 似乎与核心上的钉状物相连接;还有的在细胞质中游离存在。这可能是释放中的病毒基因组 所处的阶段不同所致 目前、尚未见到关于GCHV体内翻译的报道。但是对GCHv873毒株体外翻译的研究果 表明(柯丽华等,1992):草鱼出血病病毒 dsrNA的一条链具有mRNA的性质.可在体外进行 翻译其翻译产物为条多肽链,与病毒的结构多肽是一致的,只是片段S2S3和S编码的 多肽与病毒衣壳中的结构多肽在分子量上有所差异。推测这些体外翻译产物可能为结构多 肽的非成熟中间产物,在宿主细胞内装配过程中还需要进一步的修饰加工,这有待于进一 研究 草鱼出血病病毒的繁殖动态及细胞培养特性 GHV在鱼类细胞中的增殖过程,目前尚无详细报道,初步研究结果表明,GCHV可 能通过细胞吞噬作用进人宿主细胞,在细胞质中完成RNA的复制然后,随着RNA及其 蛋白质的合成,集中到细胞核附近的被称为毒浆结构的区域病毒在此结构中装配并发育 成熟随宿主细胞的迸裂而释放出来,重新感染其它正常细胞(毛树坚等,1989a)。GCHV 能感染培养细胞并增殖和传代,产生合胞体状细胞病变效应( cytopathic effect, CPE)(陈 燕新等,1986;方勤等,1989)。GCHV在体外培养细胞中的最适增殖温度为28℃,一般感 染12h后即开始增殖.24-72h大量增殖,培养细胞出现典型的CPE,5d左右达到最大增 1)陈燕新,李正秋,1986.草魚呼肠孤病毒的高体培养及超微病变,鱼病简讯.2海 洋 与 湖 沼 多 肽 ，有 待 于进 一 步 深 入 研 究 。 另 外 ，关 于 GCHV 的 基 因 克 隆 与 序 列 分 析 方 面 的 研 究 工 作 才 刚 刚 起 步 ，W ang等 (1994)在 国 内率 先 克 隆 了 BCHV 基 因组 的 M 和 s 片 断 ，并 对 已克 隆 的病 毒 基 因 组 片 段 进 行 了序 列 分 析 ，进 一 步 的 工作 正 在 进 行 中 。 5 草 鱼 出血 病病 毒 基 因组 的转 录和 翻 译 关 于 GCHV 在 宿 主细 胞 内 的 复 制 过 程 ，特 别 是 基 因 组 的 转 录 和 翻 译 还 知 之 甚 少 近 年 来 的 研 究 表 明 ：GCHV 核 心 内 含 有 RNA 转 录 酶 ，可 催 化 dsRNA 中 的 一 条 链 转 录 合 成 mRNA，该 酶在 28℃时 的反 应活性 最高且 能保 持 较 长的 时间 (柯 丽华等 ，l992；黄健 等 ． 1992)。 在 体 外 转 录 条 件 下 ，RNA 转 录 酶 需 要 低 离 子 浓 度 活 化 ，其 机 制 可 能 是 低 离 子 浓 度 溶 液 处 理 ，使 病 毒 粒 子 外 层 衣 壳 子 粒 松 散 脱 落 ，暴 露 出 核 心 上 的 RNA 转 录 酶 活性 基 因 ，更 利 于催 化 dsRNA 转 录 合 成 n3RNA CK2HV 转 录 酶 的 上 述 特 征 ，有 别 于 呼肠 孤 病 毒 科 的 其它 成员 ，这是 由于 它们 各 自所 适 应 不 同的 宿 主的 结 构 (黄健 等 ，1992：张保焰等， 1993)。 张保 焰等 (1993)研究 还 发现 ，GCHV基 因组 的体 内转 录分 为早 晚 两期 ，早期 转 录是在 病毒 感 染 细胞 后 4h开始 的 ，8h后 开始 晚期 转 录。转 录产物 mRNA的大 小 和数 目大体 上 与病 毒基 因 组 的一致 早期 转 录是 RNA转 录酶 以初 始感 染 的病 毒 dsRNA为模 板进 行的 转录 ；晚 期转 录则 是 以子代 病 毒 基 因组 为模 板 进 行 的转 录 ，二者 投 有本 质 上 的差 别 ，只是 转 录模 板 的来 源 不 同 GCHV 基 因组 的转 录 和 翻译 过 程都是 在宿 主细 胞 质 中完 成 的 ，病 毒 核 酸 可穿过 桉 li,上的 中空 钉 状 物释 放 到 宿主 细 胞 的细 胞 质 中 通 过 对人 _[释 放病 毒基 因组 的 电子显 微镜 观 察 ，往往 可 以 看 到三种 情形 ，：lhNA 双链 一端 与核心 衣壳相 连 ，构 成类 似反 应桉 心 的形态 有 些 RNA 双链 似 乎 与核 心上 的钉状 物相 连 接 ；还 有 的在 细 胞 质 中游 离存 在 。这 可 能是 释 放 中的病 毒 基 因组 所处 的 阶段不 同所 盈 目前 ，尚未见 到 关 于 GCHV体 内翻译 的 报道 。但是 对 GCHV873毒 株 体外 翻 译 的 研究 果 表 明 (柯 丽 华 等 ，1992)：草鱼 出血 病病 毒 dsRNA 的 一条 链 具 有 mRNA 的性 质 ，可 在体 外 进 行 翻译 ，其 翻 译 产 物 为 ll条 多 肽 链 ，与病 毒 的结 构 多肽 是 一 致 的 ，只是 片段 s s，和 s编 码 的 多肽 与病 毒衣 壳 中 的结 构 多肽 在 分 子 量 上 有所 差 异 。推 测 这些 体 外 翻 译 产 物可 能 为结 构 多 肽 的 非成 熟 中间 产 物 ，在 宿 主 细胞 内装 配 过 程 中还 需要 进一 步 的 修 饰加 工 ，这有 待 于进 一 步 研 究 。 6 草鱼出血病病毒的繁殖动态及细胞培养特性 GCHV 在 鱼 类 细 胞 中 的增 殖 过 程 ，目前 尚 无 详 细 报 道 ，初 步研 究 结 果 表 明 ，GCHV可 能 通 过 细 胞 吞 噬 作 用 进 八 宿 主 细 胞 ，在 细 胞 质 中 完 成 RNA 的 复 制 ，然 后 ，随 着 RNA 及 其 蛋 白质的合成 ，集 中到细胞核 附近的被称为毒浆结构 的 区域 ，病 毒在 此结构 中装配并发育 成 熟 ，随宿 主 细 胞 的 进 裂 而 释 放 出来 ，重 新 感 染 其 它 正 常细 胞 (毛树 坚 等 ，1989a)。CK2HV 能感 染 培 养 细 胞 并 增 殖 和 传 代 ，产 生 合 胞 体 状 细 胞 病 变 效 应 (cytopathie effect,CPE)(陈 燕 新 等 ，1986”；方 勤 等 ，1989) CK2HV 在 体 外 培 养 细 胞 中的 最 适 增 殖 温 度 为 28℃ ，一 般 感 染 12h后 即 开 始 增 殖 ，24— 72h大 量 增 殖 ，培 养 细 胞 出 现 典 型 的 CPE，5d左 右 达 到 最 大 增 )陈 燕新 李正祉 ．1986．草鱼 呼肟 孤病毒 的 离体 培养皿 超微病 变 鱼 病茼 讯 ．2 】一2 维普资讯 http://www.cqvip.com