实验十二聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、目的 了解聚丙烯酰胺盘状电泳的基本原理和操作技术。 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺单体和少量交联剂在催化剂和 加速剂的作用下发生聚合反应而制得的。聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径可用 改变凝胶液中单体的浓度来加以控制。一般分离蛋白质选用7.5%聚丙烯酰胺凝胶，分离比 较大的分子，如核糖体核酸时则用2.5%凝胶。 凝胶电泳分辨力较高。 三、器材 1.电泳仪(600V)及盘状电泳电泳槽。 2.电泳玻璃管（用碱性较低的玻璃管），内径5一7毫米，长80一100毫米。 3.玻璃架（制胶时用来垂直插放玻璃管）。 4.微量注射器或微量吸管。 5.带长针头的注射器。 6.日光灯。 7.带有玻璃珠或玻璃棒的一小段乳胶管」 四、试剂和材料 1.唾液。 2.贮液和工作溶液：按下页表配制。 五、操作方法 一般先制分离胶，再在分离胶上面制作浓缩胶。 1.分离胶的制备 将贮液由冰箱取出等达到室温后再按下表中的比例配制工作溶液。先将分离胶液与过 硫酸分别放在真空干燥器中。待抽出溶解的空气后取出，赶快混匀，用带长针头的注射器吸 取一定量的胶液，沿着管壁加到预先准备好的玻璃管中（玻璃管的一端用带有玻璃珠或小段 玻璃棒的乳胶管塞住，乳胶管中加二滴40%蔗糖后插在玻璃架上)，灌入的分离胶液高约6.5 厘米，然后立即用带弯针头的小注射器在已加入的分离胶液面上，距胶面约O.1厘米处沿管 壁缓缓加人3一5毫米高的蒸馏水层，切忌使加入之水呈滴状坠入胶液，这样会使顶部凝胶 浓度变稀，改变凝胶孔径。 水层放好后，静置胶液使进行聚合反应。正常情况下10分钟开始聚合，应控制在30 分钟到1小时内完成聚合。 刚加水时看出有界面，后逐渐消失。等到再看出界面时表明凝胶己经聚合，再静置30 分钟便聚合完全。实验十二 聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、目 的 了解聚丙烯酰胺盘状电泳的基本原理和操作技术。 二、原 理 聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺单体和少量交联剂在催化剂和 加速剂的作用下发生聚合反应而制得的。聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径可用 改变凝胶液中单体的浓度来加以控制。一般分离蛋白质选用 7.5％聚丙烯酰胺凝胶，分离比 较大的分子，如核糖体核酸时则用 2.5％凝胶。 凝胶电泳分辨力较高。 三、器 材 1．电泳仪（600V）及盘状电泳电泳槽。 2．电泳玻璃管（用碱性较低的玻璃管），内径 5－7 毫米，长 80－100 毫米。 3．玻璃架（制胶时用来垂直插放玻璃管）。 4．微量注射器或微量吸管。 5．带长针头的注射器。 6．日光灯。 7．带有玻璃珠或玻璃棒的一小段乳胶管。 四、试剂和材料 1．唾液。 2．贮液和工作溶液：按下页表配制。 五、操作方法 一般先制分离胶，再在分离胶上面制作浓缩胶。 l. 分离胶的制备 将贮液由冰箱取出等达到室温后再按下表中的比例配制工作溶液。先将分离胶液与过 硫酸分别放在真空干燥器中。待抽出溶解的空气后取出，赶快混匀，用带长针头的注射器吸 取一定量的胶液，沿着管壁加到预先准备好的玻璃管中（玻璃管的一端用带有玻璃珠或小段 玻璃棒的乳胶管塞住，乳胶管中加二滴 40％蔗糖后插在玻璃架上），灌入的分离胶液高约 6．5 厘米，然后立即用带弯针头的小注射器在已加入的分离胶液面上，距胶面约 0.l 厘米处沿管 壁缓缓加人 3－5 毫米高的蒸馏水层，切忌使加入之水呈滴状坠入胶液，这样会使顶部凝胶 浓度变稀，改变凝胶孔径。 水层放好后，静置胶液使进行聚合反应。正常情况下 10 分钟开始聚合，应控制在 30 分钟到 1 小时内完成聚合。 刚加水时看出有界面，后逐渐消失。等到再看出界面时表明凝胶已经聚合，再静置 30 分钟便聚合完全