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贮液 100ml溶液中的含量 p 工作溶液混合比 1moL盐酸 48ml 小乳的《分离胶】 T 36.6g 89 1份1号贮液 TEMED 0.23ml 2份2号 280% 1份水 2 Bis 0.753g 4份3号贮液 3 过硫酸 0.14g p8.9,凝胶浓度7% 1moL盐酸 48ml 59% 大孔乳胶(浓缩胶 67 1份4号贮液 TEMED 0.23ml 2份5号贮液 Ag 10.0g 1段6号贮液 Bis 25g 47号贮液 6 核黄素 40 p6,7凝胶浓度2.5% 芒糖 40g 电极缓冲液 T 甘氨酸 288 3 用时稀10倍 加水到1 2,浓缩胶的制各 用注射器吸去分离胶上的水层,用滤纸条吸去残留的水液(滤纸不要接触胶 面)。 按比例混匀浓缩胶液(也预先抽气,抽气时不要与核黄素混合,抽完气后再 混合),先用这种胶液很快漂洗一下分离胶的项部,除去漂洗液后,按上法加人浓 缩胶液约0.5-1厘米高,并立即仔细加水层。然后在距管10厘米处用日光灯照射 进行光聚合。正常情况下照射6一7分钟就可看到浓缩胶显乳白色,表明聚合开始。 继续照半小时,使聚合完全 除去水层,吸干后用上电极槽缓冲液洗涤,再将这种缓冲液加至管顶,在室 温放置0.5一1小时就可使用。 浓缩胶应在临用前制备。 3。加样 盘状电泳所需样品很少,用1毫克/毫升浓度的样品液每管需5一100微升, 加样前先把玻璃管下边的橡胶塞除去,要注意先拉开乳胶管使空气进人,再 拔下米,防止将凝胶拉坏。下槽中放满缓冲液,把管固定在上槽的洞中,要保证 凝胶管垂直和橡皮塞孔密封不漏。管的下端悬上一滴缓冲液,再把上槽放在下槽 上,避免管下有气泡。管中凝胶表面上部及上槽灌满电极缓冲液。 将4号贮液1份,水3份,20%蔗糖溶液4份,混和,然后取唾液3微升 加上述混合液0.15毫升,混匀后小心地加在浓缩胶与电极缓冲液界面处,因样品 液比重大,即平铺在凝胶表面。 指示染料一般用溴酚蓝或酚红,通常每管加0.1%的染料溶液0.005毫升,指 示染料与样品混合后加人。 4.电泳 贮液 100ml 溶液中的含量 pH 工作溶液混合比 1 1mol/L 盐酸 48ml 8.9 小孔乳胶(分离胶) 1 份 1 号贮液 2 份 2 号贮液 1 份水 4 份 3 号贮液 pH8.9,凝胶浓度 7% Tris 36.6g TEMED 0.23ml 2 Acr 28.0g Bis 0.753g 3 过磷酸铵 0.14g 4 1mol/L 盐酸 48ml 6.7 大孔乳胶(浓缩胶) 1 份 4 号贮液 2 份 5 号贮液 1 份 6 号贮液 4 份 7 号贮液 pH6.7,凝胶浓度 2.5% Tris 5.98g TEMED 0.23ml 5 Acr 10.0g Bis 2.5g 6 核黄素 4.0g 7 蔗糖 40g 电极缓冲液 Tri 6.0g 甘氨酸 28.8g 加水到 1 L 8.3 用时稀释 10 倍 2.浓缩胶的制备 用注射器吸去分离胶上的水层,用滤纸条吸去残留的水液(滤纸不要接触胶 面)。 按比例混匀浓缩胶液(也预先抽气,抽气时不要与核黄素混合,抽完气后再 混合),先用这种胶液很快漂洗一下分离胶的顶部,除去漂洗液后,按上法加人浓 缩胶液约 0.5-l 厘米高,并立即仔细加水层。然后在距管 10 厘米处用日光灯照射 进行光聚合。正常情况下照射 6-7 分钟就可看到浓缩胶显乳白色,表明聚合开始。 继续照半小时,使聚合完全。 除去水层,吸干后用上电极槽缓冲液洗涤,再将这种缓冲液加至管顶,在室 温放置 0. 5—1 小时就可使用。 浓缩胶应在临用前制备。 3.加样 盘状电泳所需样品很少,用 1 毫克/毫升浓度的样品液每管需 5—100 微升。 加样前先把玻璃管下边的橡胶塞除去,要注意先拉开乳胶管使空气进人,再 拔下来,防止将凝胶拉坏。下槽中放满缓冲液,把管固定在上槽的洞中,要保证 凝胶管垂直和橡皮塞孔密封不漏。管的下端悬上一滴缓冲液,再把上槽放在下槽 上,避免管下有气泡。管中凝胶表面上部及上槽灌满电极缓冲液。 将 4 号贮液 1 份,水 3 份,20%蔗糖溶液 4 份,混和,然后取唾液 3 微升, 加上述混合液 0.15 毫升,混匀后小心地加在浓缩胶与电极缓冲液界面处,因样品 液比重大,即平铺在凝胶表面。 指示染料一般用溴酚蓝或酚红,通常每管加 0.l%的染料溶液 0.005 毫升,指 示染料与样品混合后加人。 4.电泳
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