8|.°°.° ooo . oo.o.o Centrifugation time 差速离心首先要选择好颗粒沉降所需的离心力和离心时间。当以一定的离心力在 定的离心时间内进行离心时,在离心管底部就会得到最大和最重颗粒的沉淀,分出 的上清液在加大转速下再进行离心,又得到第二部分较大较重颗粒的沉淀及含较小和 较轻颗粒的上清液,如此多次离心处理,即能把液体中的不同颗粒较好地分离开。此 所得的沉淀是不均一的,仍杂有其它成分,需经过2~3次的再悬浮和再离心,才能 得到较纯的颗粒 此法主要由于组织匀浆液中分离细胞器和病毒,其优点是:操作简易,离心后用 倾倒法即可将上清液与沉淀分开,并可使用容量较大的角式转子。缺点是:须多次离 心,沉淀中有夹带,分离效果差,不能一次得到纯颗粒,沉淀于管底的颗粒受挤压, 容易变性失活。 2密度梯度区带高心法(简称区带离心法) 区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离 心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点 是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒:②适应范围广,能象差速离心法一样分离 具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒:③颗粒不会挤压变形, 能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。 此法的缺点是:①离心时间较长:②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格 不易掌握。 密度梯度区带离心法又可分为两种: (1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降129 差速离心首先要选择好颗粒沉降所需的离心力和离心时间。当以一定的离心力在 一定的离心时间内进行离心时，在离心管底部就会得到最大和最重颗粒的沉淀，分出 的上清液在加大转速下再进行离心，又得到第二部分较大较重颗粒的沉淀及含较小和 较轻颗粒的上清液，如此多次离心处理，即能把液体中的不同颗粒较好地分离开。此 法所得的沉淀是不均一的，仍杂有其它成分，需经过 2～3 次的再悬浮和再离心，才能 得到较纯的颗粒。 此法主要由于组织匀浆液中分离细胞器和病毒，其优点是：操作简易，离心后用 倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的角式转子。缺点是：须多次离 心，沉淀中有夹带，分离效果差，不能一次得到纯颗粒，沉淀于管底的颗粒受挤压， 容易变性失活。 2. 密度梯度区带离心法（简称区带离心法）： 区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离 心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。此法的优点 是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，能象差速离心法一样分离 具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；③颗粒不会挤压变形， 能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。 此法的缺点是：①离心时间较长；②需要制备惰性梯度介质溶液；③操作严格， 不易掌握。 密度梯度区带离心法又可分为两种： （1）差速区带离心法：当不同的颗粒间存在沉降速度差时（不需要像差速沉降