• 玻片细胞置于甲醇中-10℃固定5min，室温凉干（或冷 丙酮固定5min，室温凉干）； • PBS漂洗2min×3次； • 3% H2O2室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物 酶活性）； • PBS漂洗5min×3次； • 10%正常羊血清封闭液（0.1M PBS配制）室温封闭20min； 弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）； • 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37℃ 孵育1h（或4℃孵育过夜）； • PBS漂洗5min×3次； 三、实验步骤• 玻片细胞置于甲醇中-10℃固定5min，室温凉干（或冷 丙酮固定5min，室温凉干）； • PBS漂洗2min×3次； • 3% H2O2室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物 酶活性）； • PBS漂洗5min×3次； • 10%正常羊血清封闭液（0.1M PBS配制）室温封闭20min； 弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）； • 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37℃ 孵育1h（或4℃孵育过夜）； • PBS漂洗5min×3次； 三、实验步骤