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后,再延长离心时间和提高转速已无意义,处于等密度点上的样品颗粒的区带形状和 位置均不再受离心时间所影响,提高转速可以缩短达到平衡的时间,离心所需时间以 最小颗粒到达等密度点(即平衡点)的时间为基准,有时长达数日。 2. Under centrifu IsopycnIc positions 等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效 果越好,与颗粒大小和形状无关,但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带 宽度 等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝CsCl,其密度可达1.7g/cm3 此法可分离核酸、亚细胞器等,也可以分离复合蛋白质,但简单蛋白质不适用。 收集区带的方法有许多种,例如: (1)用注射器和滴管由离心管上部吸出。 (2)有针刺穿离心管底部滴出。 (3)用针刺穿离心管区带部份的管壁,把样品区带抽出。 (4)用一根细管插入离心管底,泵入超过梯度介质最大密度的取代液,将样品 和梯度介质压出,用自动部分收集器收集 离心操作的注意事项 髙速与超速离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备,因其转速高,产 生的离心力大,使用不当或缺乏定期的检修和保养,都可能发生严重事故,因此使用 离心机时都必须严格遵守操作规程。131 后,再延长离心时间和提高转速已无意义,处于等密度点上的样品颗粒的区带形状和 位置均不再受离心时间所影响,提高转速可以缩短达到平衡的时间,离心所需时间以 最小颗粒到达等密度点(即平衡点)的时间为基准,有时长达数日。 等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效 果越好,与颗粒大小和形状无关,但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带 宽度。 等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝 CSCl,其密度可达 1.7 g/cm3。 此法可分离核酸、亚细胞器等,也可以分离复合蛋白质,但简单蛋白质不适用。 收集区带的方法有许多种,例如: (1) 用注射器和滴管由离心管上部吸出。 (2) 有针刺穿离心管底部滴出。 (3) 用针刺穿离心管区带部份的管壁,把样品区带抽出。 (4)用一根细管插入离心管底,泵入超过梯度介质最大密度的取代液,将样品 和梯度介质压出,用自动部分收集器收集。 5.4 离心操作的注意事项: 高速与超速离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备,因其转速高,产 生的离心力大,使用不当或缺乏定期的检修和保养,都可能发生严重事故,因此使用 离心机时都必须严格遵守操作规程
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