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诊断学理论与实践2005年第4卷第1期 TMA的特点包括:①高通量:一次检测可获取 大量的生物学信息;②多样本:一次实验可分析成 TMA的应用现状 百上千种、同一或不同疾病的组织标本;③省时:1 2周内可完成数千个组织标本的数十个基因检测 肿瘤研究 或蛋白分子的定位、定量和定性分析;④简便经济 正因为TMA上可使用荧光原位杂交(FISH) 是传统病理学方法所需费用的1/100-1/10:⑤结果DNA、RNA杂交技术,且最具特征的是能在细胞水 可靠:一次实验可同时完成数干个组织标本的分平定位和蛋白水平检测,所以其与基因芯片的结合 析,减少批内和批间误差,实验结果更准确可靠;⑥使用具有极大的互补性,并扩大了获取信息的范 便于设计实验对照;⑦用途广泛:既可用于基础研围。目前应用生物芯片进行广泛的肿瘤研究,包括 究,又可用于临床研究。可用于分子诊断、预后指标对前列腺癌、乳腺癌、肾癌、膀胱癌、肺癌、 的筛选、治疗靶点的定位、抗体和药物的筛选、基因结肠癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胶质瘤、黑色素瘤口、 和蛋白表达分析等;⑧可进行自动化分析:用特殊淋巴瘤等。 的扫描和分析仪器即可对TMA进行自动化分析 1.肿瘤新型标志物的筛选:基因芯片是由数 ⑨与其他生物技术[HE染色、免疫组织化学(IHC)、千至数万个已知的DNA或cDNA小片段构成 原位杂交(SH)、原位PCR、原位RT-PCR(ISRT-次可对数万个基因进行检测筛选,因此其具强大 PCR)等]相结合,就可组成免疫组织化学检测分析的基因检测功能但。但这些技术不能区分原发性 系统,若再与基因芯片、蛋白质芯片相结合,即可组与继发性改变的基因。因此基因芯片筛选出的 成完整的基因表达分析系统。 侯补肿瘤基因必需放到大量的病例中检验,且还 三、TMA设计、制作及使用过程中易出现的问需大量体外和体内实验的验证,传统的方法很难 题以及解决方法郾刘 完成这一耗时耗资的检验工作,而TMA技术却能 1芯片中组织片面积大小的选择:其选择关系迅速完成这一工作,即先将基因芯片筛选出的特 到对某一疾病是否具有代表性、实验结果的可靠殊基因做成探针,再将探针与TMA中众多的肿瘤 性:一般情况下,在直径为2mm的组织片上有约组织进行ISH,然后找出哪些基因产物与肿瘤具有 100000个细胞,而直径0.6mm的组织片上仅有约 相关性3-23。 Bubendorf等对前列腺癌激素治疗 30000个细胞。组织片太大,则失去了高通量、多样失败的病因学进行了cDNA芯片表达谱研究,并对 本、省时快速的意义;而组织片太小,则很难反映疾发现的高表达基因作了TMA验证,筛选到在前列 病的本质,同时也增加了人工观察和分析的难度。腺癌激素治疗失败的样本中显著表达的胰岛素样 所以在TMA设计中不是组织片的数量越多越好 生长因子结合蛋白2,提示胰岛素样生长因子可能 特别是在肿瘤分化程度的差异大或肿瘤的异质性是前列腺癌发展过程中关键的信号调节途径。 明显时,更要注意组织片大小的制定。目前,国际上 Barlund等m使用4209点的cDNA芯片发现了 常用的TMA的样本量多为60-100个,组织片的直MCF7乳腺癌细胞系中核糖体蛋白S6激酶过表达 径在2mm左右。 的基因,并将其定位在17q23区段,又运用TMA研 2.无效组织:减少或避免无效组织的关键是准究表明核糖体蛋白S6激酶不仅在乳腺癌细胞中高 确的组织定位;其次是TMA的厚度,多数专家认为表达,而且还具有很高的酶活性。进一步研究发现 以4-5mm为宜 核糖体蛋白S6激酶和HER2的高表达与较低的 3.组织片的移位或脱落:用阵列蜡块切片时,存活率显著相关。 若用水漂浮裱片,水温过高易导致组织片移位。使 2.肿瘤免疫表型研究:到2004年12月国内发 用石蜡切片辅助带移系统( paraffin section aid tape 表的126篇运用TMA研究的文章中大多为肿瘤免 transfer systen)进行干裱片及紫外线灯烤片,同时疫表型的研究。我们应用TMA进行了乳腺癌相关 再用01%的多聚赖氨酸等预处理载玻片,能有效蛋白的研究四,主要包括ER、PR、p53 C-erbB-2 地避免制片过程中组织片的移位或脱落。随着生物E- cadherin等,结果表明染色效果和实验结果与常 芯片信息计算机处理系统( (biochips computer pro-规病理学(大组织片)方法的结果一致四。另外还 cessing database)的冋世,使TMA的自动化分析和进行了淋巴瘤中颗粒酶B和穿孔素研究,结果表明 标准化成为可能。 两者存在于活化的T淋巴细胞中,在NK细胞淋!"#$%&’( !""# )* $ +* % , &’( -./01!!234!56789:; <4-=>?@A""BCD!5E’F9GHI JKLM#N5OPNQR-STUV"#WX!%! ! YZ9[\]L^STUD-]_^‘abc OdeGf-gh#g4igjGH"$klmn! opqR$?rstuvw- %)%""!%)%""%xy 9z! 5E’F9NX[\]L^ST{D-G H$|}~Zi~$’Fxy9z"& l
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