许淑英等,草鱼出血病病毒减毒的研究 213 细胞无不良影响细胞生长正常。 表1PSF细胞系在含不同浓度桉的培养液中的生长情况 Tab. 1 Growth of cell line (psF) in culture solution wlth different concentration of liquld being from An leaves 培养时间(小时 棱液浓度 100多数细胞聚成小团,呈垦状生长多数绷胞呈星状生长尚有部分细胞呈星状生长不能长成单层细胞 1.200多数细胞聚成小团呈垦状生长细胞生长较均匀 长成单层细胞〔90%长满)部分细胞高壁或贴壁不牢 1500多数细胞聚成小团,呈星状生长细胞生长较均匀 长成单层细胞〔9%长滴)少部分细胞离壁 11000生长正常(细胞分散,生长均匀)生长正常 长成单层细胞〔90%长满)长成致密单层细胞 15000生长正常(细胞分散,生长均匀)生长正常 长成单层细胞〔90%长满)长成致密单层细 110000生长正常(细胞分散,生长均匀》生长正常 长成单层细胞〔90%长满〕长成致密单层细胞 对照生长正常(细胞分散,生长均匀》生长正常 长成单层细胞〔90%长满)长成致密单层细胞 2.2三种不同浓度桉对892株的减毒效果 将PSF细胞分别在含核为11000、1:5000 和1:10000三种浓度的培养液中传代并接入病 毒,置28℃培养8~10天。将收获后的三种浓度 细胞原(1)代病毒液稀释102倍,分别接种草鱼 结果三组草鱼的发病死亡率均高达90% 100%表明原代病毒均具强的毒力将上述的 892株在细胞中传至19代,每隔5~7代取病毒稀 释液分别接种草鱼,结果见图1。从图1可以看 出,三种浓度的桉液对892株毒力减弱迅速。三确代量 组病毒传至第6代引起草鱼发病死亡率降至 20%~70%,传至第13代引起草鱼发病死亡率图1三种楼液浓度作用下收获的细胞病毒液 对草鱼致病减弱的情况 病毒在该三种核浓度中传代都几乎同时达到减Fig1 Effect of virus solution of cell under3 毒目的。 different concentrations of An liquid 2.3桉液对19~29代病毒的减毒效果 on ability of coningdisease of grass carp 注:病毒稀释度102,剂量0.2mL/尾 在11000浓度核液作用下,病毒在PSF细 胞中从19代连续传至29代,取各代细胞病毒液分别稀释10和102倍注射草鱼。观察15天草鱼均 不发病。再以草鱼出血病强毒(毒价为101LDs/0.2mL)攻毒。观察15天,其免疫保护率均达 100%(见表2)结果表明病毒在这一浓度的核液作用下减毒明显减毒效果稳定,安全性好, 且免疫保护率高。 2.4不再加桉液的第28~37代病毒液的安全性和免疫原性 通过核液减毒的892株传至27代,培养液中不再加入核液。对28~37代的细胞病毒液分别 稀释10~10倍,注射草鱼后的成活率和免疫保护率均达100%(见表3)表明病毒株经核液作3期 许 淑英 等 t草 鱼出 血病病 毒 减毒 的研 究 细胞无不 良影响 ，细胞 生长 正常 表1 PSF细胞幕在含不同浓鏖按的培井液 中的生长情况 Tab 1 Growth ofcellHne (PSF)in culturesolution with differentoDnoen订 It10n of liquid being from An Ie¨ 睁 萎l和毒细结8释O9胞21，果液株置％。原1分三2。在0表8(别组1细℃)明接培代草胞三原种养病中鱼代草毒传8浓的病～鱼至液度发1毒．稀o的病结9均天代释培果死具。将1．养每0见亡强液收倍隔图的率获中，51分毒均～后。传从别力7高的代接达并三将取1种接上可9病0草述入浓毒以鱼病度看～的稀。《．o『}l【II_-_．-_-●-_-_●一■_-工． —_-IL 2．4 不再 加桉 液的第28~37代病毒液的安全性和免疫原性 通过桉 液减毒 的892株传 至27代 ，培养 液 中不再 加入桉 液 。对28～37代 的细胞病毒 液分别 稀释 1ol～lO倍 ，注射 草鱼后的 成活率和免疫保护率 均达 10O (见表3)。表 明病毒株 经桉液作 维普资讯 http://www.cqvip.com