实验九荧光抗体技术 荧光抗体技术是指用荧光素对抗原或抗体进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧 光以分析示踪相应的抗原或抗体的方法。该技术将血清学的特异性和敏感性与显微技术的精 确性结合起来，解决了生物学上的许多难题，如病毒的侵袭途径及其感染细胞内复制部位的 研究，以及抗体的产生部位等。随着荧光抗体技术的敏感性和特异性的进一步提高，该技术 在病原微生物的早期诊断、肿瘤抗原的研究、抗原抗体免疫组化定位等方面得到了广泛应用。 [目的要求] 1.掌握荧光抗体染色法诊断猪瘟的基本操作步骤。 2.了解荧光抗体技术的基本原理。 [材料与试剂] 1.载玻片，盖玻片，冰冻切片机，荧光显微镜， 2.0.01mo1/LPBS(pH7.2)。 3。缓冲甘油：优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份混合而成。 4.碳酸盐缓冲液：0.5mo1/L碳酸钠1份与0.5mo1/1碳酸氢钠3份混合。 4.猪瘟荧光抗体，猪瘟抗血清，病猪的扁桃体或肾脏等。 [操作方法] 1.切片制备：将冰冻的扁桃体或肾脏进行切片，置载玻片上，空气中自然干燥后，立刻 在室温下放入纯丙酮周定15min。 2.洗涤：将固定好的切片以PBS轻轻漂洗5次，每次3min。 3.染色：在晾干的标本片上滴加猪滥荧光抗体（工作浓度），以覆盖为度，放湿盒内置 37C染色30min。 4.洗涤：取出标本片，以吸管吸PS冲去玻片中的荧光抗体，然后置大量PBS中漂洗5 次，每次3min,再以蒸馏水冲洗晾干。 5.封载：染色片半干时，滴加缓冲甘油封片。 本试验需设定以下对照： (1)阳性对照：含有猪瘟病毒的组织所作的切片： (2)自发荧光对照，以PBS代替荧光抗体染色： 之