6.洗涤：同上 7.加底物显色：取10m1柠檬酸盐缓冲液，加0PD4m1和3%H202100L,每孔加50ul, 置湿盒内避光显色10min。 8.终止反应：每孔加2mo1/LH2S01溶液100ul.终止反应。 9.结果判定：以酶标仪检测样品的0D值（波长490m),先以空白孔谓零，当0D≥2.1 即判断为阳性。 注意：每块ELISA板均需在最后一挂的后3孔设立阳性对照、阴性对照和空白对照。 (二)夹心ELISA(以鸡传染性法氏囊病病毒检测为例) 1.包被：用包被液将IBDV特异性抗体稀释为25-100ug/ml,以100μL/孔的量加入酶 标板中，置4℃过夜吸附或37℃吸附120min。 2.洗涤：PBST冲洗酶标板，共洗3次，每次3min。 3.封闭：用封闭液封闭，200uL/孔，4℃过夜域37℃120min:PBsT洗3次，每次1min。 4.加待检IBDV抗原：每孔加1O0uL待检IBDV抗原，同时设立阴、阳性对照，37℃解 育45-90min:PBST洗3次，每次3min。 5.加酶标抗体：每孔加100uL酶标鼠抗1BDV的单抗，37℃期育45-90min:PBST洗3 次，每次5min。 6.加底物溶液：每孔加底物溶液(0PD和He02)100μL，37℃避光作用20min。 8.终止反应：每孔加2mo1/LHS01溶液50uL终止反应。 9.结果判定：在酶标仪上读取0D值（波长490mm),当0D≥0.3，并且P/N≥2.1，为 阳性。 [思考题] 1.兔疫酶技术的原理是什么？ 2.间接ELISA和夹心ELI5A的操作步蝶是什么？ 3.猪群猪瘟抗体监测对指导猪瘟免疫有何实际意义？ 20