实验八酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)是目前发展最快，应 用最广泛的一种免疫学检测技术。其基本过程是将抗原或抗体吸附于周相载体上，在载体上 进行免疫酶染色，底物显色后以肉眼或酶标仪检测结果。通过醇与底物作用呈现颜色的深度， 进行定量或定性分析。本试验将抗原抗体反应的特异性与酶的高催化活性相结合，使测定方 法达到很高的敏感性，且特异性强，可用于生物活性物质的微量检测及疾病诊断，广泛应用 于整个生命科学领域 [目的要求] 1.掌握酶联免疫吸附试验的原理及基本操作方法。 2.了解猪群猪瘟抗体监测的意义及鸡传染性法氏囊病病毒检测的方法。 [材料与试剂] 1.酶标板，酶联检测仪（酶标仪），微量加样器，滴头(tp头)。 2.0.01mol/LPBS(pH7.2),0.01mo1/L PBST(含0.01%土温20)，2mol/LHS04, p9.6碳酸盐缓冲液（包被液），封闭液，邻苯二胺(0PD),3%H02,柠檬酸盐缓冲液。 3猪瘟病毒抗原，兔抗猪1gG酶标抗体，待检血清，猪瘟阳性血清，猪瘟阴性血清。 4.鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体，IBDV抗原，待检IBDV抗原，酶标抗 IBDV的单克隆抗体 [实验内容与操作方法] (一)间接ELISA(以猪遮抗体的检测为例，该法可用于猪瘟抗体监测) 1.包被：用碳酸盐缓冲液稀释猪瘟病毒抗原至1ug/ml,以微量加样器每孔加样100ul, 置湿盒内37℃包被2-3h。 2.洗涤：以PBST冲洗酶标板，共洗5次，每次3min。 3.加待检血清：每孔加100 uL PBS5,然后在酶标板的第1孔加100uL待检血清，以微 量加样器反复吹吸儿次混匀，吸100L加至第2孔，依次倍比稀释至第10孔，剩余的100 弃去，置湿盒内37℃作用2h。 4.洗涤：同上。 5.加南标抗体：以PBS将兔抗猪IgG酶标抗体稀释至工作浓度，每孔加100μl,置湿 盒内37℃作用2h 19