NAD(P)H+H NAD(P)* +H,O -NH3 胞嘧啶 尿嘧啶 氢尿嘧啶 NH3+CO2+H,NCH,CH, COOH _ +H2o NCoNHChCHCOOH β-丙氨酸 脉基丙酸 NAD(P)H+H NAD(P) CH H2O H,NCONHCHCHCOOH 脲基异丁酸 胸腺嘧啶 二氢胸腺嘧啶 CH3 NH3+CO2+ H2NCH2CHCOOH β-氨基异丁酸 图13-6嘧啶碱的分解代谢 第三节遗传工程 遗传工程也叫基因工程,是指将不同的DNA片段(如基因等)按人们的设计方案定向地连接起来,并 在特定的受体细胞中与载体一起得到复制与表达,使受体细胞获得新的遗传特性。基因是指具有特定生 物功能的DNA片段,如编码一个蛋白质分子或多肽。基因工程的用途主要有三个方面:一是利用DNA 重组技术大量生产一些在正常细胞代谢中产量很低的物质,如酶类;二是定向地改造生物基因组结构 使它某些具有经济价值的功能得以显著提高;三是将DNA重组技术应用于基础研究。 、DNA的限制醵图谱 限制性内切酶限制性内切酶主要在细菌中产生。限制酶具有极高的专一性,识别双链DNA上 特定的位点,将两条链都切断,形成粘性末端或平末端,其生物功能在于降解外面侵入的DNA,但不降 解自身细胞中的DNA,因为在自身DNA的酶切位点上经甲基化修饰而受到保护。 限制酶的特定酶切位点的长度在4~8个碱基对范围内,通常具回文结构。限制酶较为稳定,作用时 需Mg2及一定的盐浓度。常用限制酶约有100多种。已有商品出售,表13-1中列出了一些限制酶的切割 位点。 2、DNA的限制酶图谱将用分子克隆法,从单一克隆中扩增而制备的纯化DNA用不同的限制酶切 割,进行凝胶电泳分析。对环形DNA则找出一个对该DNA只有一个切位点的酶,以此点作为参考点, 根据测量凝胶电泳图上各酶切片段的长度,就可以决定各切点的位置。将各限制酶的切点位置标在DNA 分子图的相应位置上,即制成DNA的限制图谱。以便进行基因定位与摄取 65N N H O NH2 HN N H O O HN N H O O NH3+CO2+H2NCH2CH2COOH H2NCONHCH2CH2COOH HN N H O O CH3 HN N H O O CH3 H2NCONHCH2CHCOOH +H2O -NH3 NAD(P)H+H+ NAD(P)+ NAD(P)H+H+ NAD(P)+ H2O H2O a b d +H2O c c' b' H2O d' NH3+CO2+ H2NCH2CHCOOH CH3 CH3 胞嘧啶 尿嘧啶 二氢尿嘧啶 胸腺嘧啶 二氢胸腺嘧啶 -脲基异丁酸 -丙氨酸 -脲基丙酸 β-氨基异丁酸 β β β 图13-6 嘧啶碱的分解代谢 第三节 遗传工程 遗传工程也叫基因工程，是指将不同的 DNA 片段(如基因等)按人们的设计方案定向地连接起来，并 在特定的受体细胞中与载体一起得到复制与表达，使受体细胞获得新的遗传特性。基因是指具有特定生 物功能的 DNA 片段，如编码一个蛋白质分子或多肽。基因工程的用途主要有三个方面：一是利用 DNA 重组技术大量生产一些在正常细胞代谢中产量很低的物质，如酶类；二是定向地改造生物基因组结构， 使它某些具有经济价值的功能得以显著提高；三是将 DNA 重组技术应用于基础研究。 一、DNA 的限制酶图谱 1、限制性内切酶 限制性内切酶主要在细菌中产生。限制酶具有极高的专一性，识别双链 DNA 上 特定的位点，将两条链都切断，形成粘性末端或平末端，其生物功能在于降解外面侵入的 DNA，但不降 解自身细胞中的 DNA，因为在自身 DNA 的酶切位点上经甲基化修饰而受到保护。 限制酶的特定酶切位点的长度在 4～8 个碱基对范围内，通常具回文结构。限制酶较为稳定，作用时 需Mg2+及一定的盐浓度。常用限制酶约有 100 多种。已有商品出售，表 13-1 中列出了一些限制酶的切割 位点。 2、DNA 的限制酶图谱 将用分子克隆法，从单一克隆中扩增而制备的纯化 DNA 用不同的限制酶切 割，进行凝胶电泳分析。对环形 DNA 则找出一个对该 DNA 只有一个切位点的酶，以此点作为参考点， 根据测量凝胶电泳图上各酶切片段的长度，就可以决定各切点的位置。将各限制酶的切点位置标在 DNA 分子图的相应位置上，即制成 DNA 的限制图谱。以便进行基因定位与摄取。 265