表13-1限制性内切藤识别的位置 识别位点 A-A-g EcoR I E coli r 5-N-GTA-A-T-T-C-N E. coli r 1—G一G-4-C-C-N5 EcoR II 5-CC-+-d-0- Hind I Hemophilus influence D -C-A-R-Y-T-G-5 J-G-TY-R-A-C T—c-G-A·A-5 HindI Hemophilus influence D 5-A-A-G--C-T-T Hpa Hemophilus parainfluenzae 5—N一G-TT一A-A-C-N N一G-G-c-c-N-5 HpallHemophilus parainfluenzae 5—C—C-G一G-N N一C-CG-G-N一5 Haelll Hemophilus aegypticus 5一N一G一G-C—C-N R代表嘌呤核苷酸,Y代表嘧啶核苷酸 、基因载体 将外源DNA片段带入受体细胞并在其中一起进行复制与表达的运载工具称为载体。细菌和酵母的质 粒,噬菌体(如λ噬菌体,M13)和病毒为常见的载体 质粒质粒是一种在细菌染色体以外的遗传单元,一般由环形双链DNA构成,其大小从1~ 200kb不等,可分两类。能独立进行复制而不受寄主细胞染色体复制全过程控制的质粒称松弛型控制质 粒。此类质粒常用作载体。质粒的复制受细菌染色体复制的严格控制,只有染色体本身复制时才能进行 复制的质粒称为严紧型控制质粒。因其拷贝数低而不宜作载体。 2、噬菌体λ噬菌体是大肠杆菌中的一种双链DNA噬菌体,在他的整个基因组中,有很大一部分 DNA序列对噬菌体的感染性并不是必需的。因此可用外源DNA取代。此时,噬菌体携带外源DNA 起增殖 另两个很有用的载体是噬菌体M13和装配型质粒。 、DNA重组技术 DNA重组技术包括三个步骤,第一步是把所需要的DNA片断(基因)和基因载体取出,使之进行基 因的体外重组;第二步是通过转化或感染将重组DNA引入受体细胞;第三步是筛选出含重组体的活细 胞,使目的基因成为细胞遗传物质的一部分,并使之有效地表达和稳定地遗传。 66表 13-1 限制性内切酶识别的位置 酶 来源 识 别 位 点 EcoRⅠ E. coli R EcoRⅡ E. coli R HindⅡ Hemophilus influenzce D HindⅢ Hemophilus influenzce D HpaⅠ Hemophilus parainfluenzae HpaⅡ Hemophilus parainfluenzae HaeⅢ Hemophilus aegypticus R 代表嘌呤核苷酸，Y 代表嘧啶核苷酸 二、基因载体 将外源DNA片段带入受体细胞并在其中一起进行复制与表达的运载工具称为载体。细菌和酵母的质 粒，噬菌体(如λ噬菌体，M13)和病毒为常见的载体。 1、质粒 质粒是一种在细菌染色体以外的遗传单元，一般由环形双链 DNA 构成，其大小从 1～ 200kb 不等，可分两类。能独立进行复制而不受寄主细胞染色体复制全过程控制的质粒称松弛型控制质 粒。此类质粒常用作载体。质粒的复制受细菌染色体复制的严格控制，只有染色体本身复制时才能进行 复制的质粒称为严紧型控制质粒。因其拷贝数低而不宜作载体。 2、噬菌体 λ 噬菌体是大肠杆菌中的一种双链 DNA 噬菌体，在他的整个基因组中，有很大一部分 DNA 序列对噬菌体的感染性并不是必需的。因此可用外源 DNA 取代。此时，λ 噬菌体携带外源 DNA 一 起增殖。 另两个很有用的载体是噬菌体M13和装配型质粒。 三、DNA 重组技术 DNA 重组技术包括三个步骤，第一步是把所需要的 DNA 片断(基因)和基因载体取出，使之进行基 因的体外重组；第二步是通过转化或感染将重组 DNA 引入受体细胞；第三步是筛选出含重组体的活细 胞，使目的基因成为细胞遗传物质的一部分，并使之有效地表达和稳定地遗传。 266