、实验操作一一本次实验步骤 洗净双手,入无菌室缓冲间穿戴工作服、帽子、口罩后进入无菌 室 2.点燃煤气或酒精),用巧5‰%乙醇棉球抹拭双手、操作台表面 各种试剂瓶口和瓶身。 、3消化细胞。取接种3-5天已形成单层细胞的培养皿,将原有培 养液弃去。吸取1-2mL的胰酶加入到培养皿内(从侧面加入,勿真 接冲洗细胞单层),轻摇数次后弃去。吸取2mL的消化液加入到 养皿内(丛侧面加入,勿直接冲洗细胞单层),轻摇数次使消化液 均匀分布在细胞表面。室温消化1--2min,待细胞单层上出现透明 针尖样 原时(此时镜检可见成片层的细胞收缩成圆形,细胞与 细胞之间相互接触松散或互不接触),弃去大部分消化液(留下100 200uL液体),然后迅速加入32m完全培养液进行中和,用Tip头吸 打细胞数次,使细胞团块成单,弃去1m细胞悬液。 4、细胞接种。吸出1m的细胞悬液在35mm培养皿内,再添加新鲜 的完全培养基1mL。混合均匀(前后或左右小幅晃动),编号,放 置到细胞培养箱内进行培养,隔天观察结果。三、实验操作——本次实验步骤  l. 洗净双手，入无菌室缓冲间穿戴工作服、帽子、口罩后进入无菌 室。  2．点燃煤气(或酒精)灯，用75％乙醇棉球抹拭双手、操作台表面、 各种试剂瓶口和瓶身。  3. 消化细胞。取接种3－5天已形成单层细胞的培养皿，将原有培 养液弃去。吸取1-2 mL的胰酶加入到培养皿内（丛侧面加入，勿直 接冲洗细胞单层），轻摇数次后弃去。吸取2mL的消化液加入到培 养皿内（丛侧面加入，勿直接冲洗细胞单层），轻摇数次使消化液 均匀分布在细胞表面。室温消化1—2min，待细胞单层上出现透明 针尖样小孔隙时（此时镜检可见成片层的细胞收缩成圆形，细胞与 细胞之间相互接触松散或互不接触)，弃去大部分消化液（留下100- 200 uL液体），然后迅速加入32mL完全培养液进行中和，用Tip头吸 打细胞数次，使细胞团块成单，弃去1ml细胞悬液。  4. 细胞接种。吸出1mL的细胞悬液在35mm培养皿内，再添加新鲜 的完全培养基1mL。混合均匀（前后或左右小幅晃动），编号，放 置到细胞培养箱内进行培养，隔天观察结果