免疫酶技术 刘昱宏14340220005 技术原理及特点 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化 用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体或 抗原抗体反应的特异性 抗原联结,与相应的抗原或抗体作用 过底物的颜 反应作抗原抗体的定性和定量,亦可用于组织中抗原或 体的定位,定性或定量研究,即酶免疫组织化学技术 该技术有灵敏度高,特异性强,准确性好的特点,酶标 酶高效锥化反应的专一性 记能够较长时间保持稳定,操作简便对环境无污染。并且 易于其他技术联系衍生出适用范围更广的新方法。 主要试剂 酶标记的抗体或抗原 酶标物特点 技术分类介绍 疫学活性 酶免疫技术分为酶免疫组化(组织接片或其它标本中 酶对底物的催化活性 定量),其中酶免疫测定分为均相酶免疫测定与非 免疫测定。 1.均相酶免疫测定:用于小分子激素和半抗原的测定。最具代表性的两种技术为酶放大免疫测定技 术(EMT)与克隆酶供体免疫分析(CED|A)。 2非均相酶免疫测定:与均相不同之处在于需要分离有利于结合的酶标记。分为液相与固相酶免疫 测定。以聚苯乙烯等作为固相载体的酶联免疫吸附试验(EL丨SA)是目前最为常用的固相酶免疫测 三.酶联免疫吸附试验(EL丨SA) 作为酶免疫测定技 术中应用最广的技术。 Capture/Sandwich Direct 其基本方法是将已知的 抗原或抗体吸附在固相 载体(聚苯乙烯微量反 应板)表面,使酶标记 的抗原抗体反应在固相 液相中的游离成分洗除 常用的ELSA法有双de 抗体夹心法和间接法 Primary Ab Bound 刖 者用于检测大分子抗 原,后者用于测定特异 抗体 双抗体夹心法:用一只抗体包被,加入待检血清,再加酶标记抗体,加底物显色。应用于二价或 价以上大分子抗原测定(甲胎蛋白等)。一般之操作步骤为 将具有专一性之抗体固著( coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体 加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结 洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结 待测抗原 洗免疫酶技术 刘昱宏 14340220005 ⼀.技术原理及特点 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的⾼效催化 作⽤有机结合的⼀种⽅法。它以酶作为标记物，与抗体或 抗原联结，与相应的抗原或抗体作⽤后，通过底物的颜⾊ 反应作抗原抗体的定性和定量，亦可⽤于组织中抗原或抗 体的定位，定性或定量研究，即酶免疫组织化学技术。 该技术有灵敏度⾼，特异性强，准确性好的特点，酶标 记能够较⻓时间保持稳定，操作简便对环境⽆污染。并且 易于其他技术联系衍⽣出适⽤范围更⼲的新⽅法。 ⼆.技术分类介绍 酶免疫技术分为酶免疫组化（组织接⽚或其它标本中的抗 原定位）与酶免疫测定（液体标本中抗原或抗体的定性预 定量），其中酶免疫测定分为均相酶免疫测定与⾮均相酶 免疫测定。 1.均相酶免疫测定：⽤于⼩分⼦激素和半抗原的测定。最具代表性的两种技术为酶放⼤免疫测定技 术（EMIT）与克隆酶供体免疫分析（CEDIA）。 2.⾮均相酶免疫测定：与均相不同之处在于需要分离有利于结合的酶标记。分为液相与固相酶免疫 测定。以聚苯⼄烯等作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISA）是⺫前最为常⽤的固相酶免疫测 定。 三. 酶联免疫吸附试验（ELISA） 作为酶免疫测定技 术中应⽤最⼲的技术。 其基本⽅法是将已知的 抗原或抗体吸附在固相 载体 ( 聚苯⼄烯微量反 应板 ) 表⾯，使酶标记 的抗原抗体反应在固相 表⾯进⾏，⽤洗涤法将 液相中的游离成分洗除。 常⽤的 ELISA 法有双 抗体夹⼼法和间接法， 前者⽤于检测⼤分⼦抗 原，后者⽤于测定特异 抗体。 1.双抗体夹⼼法：⽤⼀只抗体包被，加⼊待检⾎清，再加酶标记抗体，加底物显⾊。应⽤于⼆价或 ⼆价以上⼤分⼦抗原测定（甲胎蛋⽩等）。⼀般之操作步骤为： 将具有专⼀性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 加⼊待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进⾏专⼀性键结 洗去多余待测检体，加⼊另⼀种对抗原专⼀之⼀次抗体，与待测抗原进⾏键结 洗去多余未键结⼀次抗体，加⼊带有酵素之⼆次抗体，与⼀次抗体键结