③细胞计数:使用正置显微镜进行观察和拍照,把 Transwell小室反过来底朝上 就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也可用手术刀将膜切下后染色,再 贴在玻片上,滴二甲苯,再盖上盖玻片,就可以长期保存。 随机选取5个视野计数细胞个数。 B、“非贴壁”细胞计数由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系,有时细 胞在穿过膜后不能附着在膜上,而是掉进下室。可以收集下层培养液,用流式细 胞仪计数细胞量,也可用细胞计数的方法直接在镜下计数 (2)间接计数法 间接计数法主要用于穿过细胞过多,而无法通过计数获得准确的细胞数所采 用的方法,与常用的MTT实验是同样的原理。①用棉签擦去基质胶和上室内的 细胞:②24孔板中加入500μ含0.5ng/mMTT的完全培养基,将小室置于其中, 使膜浸没在培养基中,37℃4h后取出;③24孔板中加入500μ L DMSO,将小室 置于其中,使膜浸没在DMsO中,振荡l0min,使甲臢充分溶解。取出小室, 24孔板于酶标仪上测OD值。 (江苏大学金洁,复旦大学刘晓宇)③细胞计数：使用正置显微镜进行观察和拍照，把 Transwell 小室反过来底朝上 就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也可用手术刀将膜切下后染色，再 贴在玻片上，滴二甲苯，再盖上盖玻片，就可以长期保存。 随机选取 5 个视野计数细胞个数。 B、“非贴壁”细胞计数由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细 胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室。可以收集下层培养液，用流式细 胞仪计数细胞量，也可用细胞计数的方法直接在镜下计数。 （2）间接计数法 间接计数法主要用于穿过细胞过多，而无法通过计数获得准确的细胞数所采 用的方法，与常用的 MTT 实验是同样的原理。①用棉签擦去基质胶和上室内的 细胞；②24 孔板中加入 500µl 含 0.5mg/ml MTT 的完全培养基，将小室置于其中， 使膜浸没在培养基中，37℃ 4h 后取出；③24 孔板中加入 500µl DMSO，将小室 置于其中，使膜浸没在 DMSO 中，振荡 10min，使甲臜充分溶解。取出小室， 24 孔板于酶标仪上测 OD 值。 （江苏大学 金洁，复旦大学 刘晓宇）