实验二细菌的人工培养 细菌的培养检査法是很重要的微生物学实验基本技术。显微镜检査有一定的局限性,如 标本内致病微生物含量少,或杂菌数量多,就需用人工培养法加以分离、增殖,然后根据其 特性加以鉴别并进行诊断。进行药物的无菌检查、菌苗的制备或基因工程中目的基因的扩增 及基因产物一目的蛋白的表达,也需进行细菌的人工培养。 培养基的配制 培养基是培养细菌的营养物制品,一般基础培养基应含有使细菌生长和繁殖的各种营养 物,包括蛋白胨、肉浸液、氯化钠、水分等,有时加琼脂以成固态。培养基按其物理性状分 固体、半固体和液体培养基。按其用途,可分基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别 培养基及厌氧培养基等。培养基制成后除含一定的营养外,还必须有一定的酸碱度(pH 7.2-7.6),本身必须澄清及保证无菌方可使用 培养基的主要用途有:(1)繁殖及分离细菌;(2)保存菌种;(3)鉴别细菌:(4)研究 细菌生理;(5)制备菌苗、抗生素或基因工程实验的细菌培养等 (一)肉汤培养基:肉汤培养基常用瘦牛肉制成,如无牛肉可用牛肉膏代替。 【成分】 新鲜绞碎瘦牛肉500g 氯化钠5g 蛋白胨 蒸馏水1000m1 【制法】 1.称取去筋膜无油脂的瘦牛肉500g,用绞肉机绞碎加水1000m1,搅匀浸于搪瓷锅内 置冰箱过夜,除去液面上的浮油。过夜的目的是使牛肉的水溶性养料充分的渗透出来。 2.次日取出,煮沸0.5h(若不经冰箱过夜,可直接煮沸1h)。用绒布过滤,肉汤中的 液体尽量挤净。 3.用1000ml肉汁中加蛋白胨10g,氯化钠5g,搅拌加热使完全溶解,并滤出肉汁,用 蒸馏水补足至原量 4.冷至40~50℃时,用氢氧化钠校正p至7.8,煮沸10min(因肉浸液中部份碳水化 合物经加热破坏,分解产酸而影响pH,加热可使其稳定),然后补充失去水分,用脱脂棉过 滤,滤液须澄清。 5.分装于试管或三角烧瓶,塞好棉塞或塑料塞,高压蒸气66.75N(15磅121℃)20mi 灭菌。 注:如有牛肉膏制肉汤培养基,配方如下: 牛肉膏 氯化钠 蛋白胨 蒸馏水 100ml10 实验二 细菌的人工培养 细菌的培养检查法是很重要的微生物学实验基本技术。显微镜检查有一定的局限性，如 标本内致病微生物含量少，或杂菌数量多，就需用人工培养法加以分离、增殖，然后根据其 特性加以鉴别并进行诊断。进行药物的无菌检查、菌苗的制备或基因工程中目的基因的扩增 及基因产物－目的蛋白的表达，也需进行细菌的人工培养。 一、培养基的配制 培养基是培养细菌的营养物制品，一般基础培养基应含有使细菌生长和繁殖的各种营养 物，包括蛋白胨、肉浸液、氯化钠、水分等，有时加琼脂以成固态。培养基按其物理性状分 固体、半固体和液体培养基。按其用途，可分基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别 培养基及厌氧培养基等。培养基制成后除含一定的营养外，还必须有一定的酸碱度(pH 7.2-7.6)，本身必须澄清及保证无菌方可使用。 培养基的主要用途有：(1) 繁殖及分离细菌；(2) 保存菌种；(3) 鉴别细菌；(4) 研究 细菌生理；(5) 制备菌苗、抗生素或基因工程实验的细菌培养等。 （一）肉汤培养基：肉汤培养基常用瘦牛肉制成，如无牛肉可用牛肉膏代替。 【成分】 新鲜绞碎瘦牛肉 500g 氯化钠 5g 蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml 【制法】 1．称取去筋膜无油脂的瘦牛肉 500g，用绞肉机绞碎加水 1000ml，搅匀浸于搪瓷锅内， 置冰箱过夜，除去液面上的浮油。过夜的目的是使牛肉的水溶性养料充分的渗透出来。 2．次日取出，煮沸 0.5h (若不经冰箱过夜，可直接煮沸 1h)。用绒布过滤，肉汤中的 液体尽量挤净。 3．用 1000ml 肉汁中加蛋白胨 10g，氯化钠 5g，搅拌加热使完全溶解，并滤出肉汁，用 蒸馏水补足至原量。 4．冷至 40~50℃时，用氢氧化钠校正 pH 至 7.8，煮沸 10min (因肉浸液中部份碳水化 合物经加热破坏，分解产酸而影响 pH，加热可使其稳定)，然后补充失去水分，用脱脂棉过 滤，滤液须澄清。 5．分装于试管或三角烧瓶，塞好棉塞或塑料塞，高压蒸气 66.75N (15 磅 121℃)20min 灭菌。 注:如有牛肉膏制肉汤培养基，配方如下： 牛肉膏 0.5g 氯化钠 0.5g 蛋白胨 1g 蒸馏水 100ml