液层厚度,吸收杯光径长度。A-—吸光度 最大吸收波长λma时的ε和E1%,max值可用下式换算 e=E1%max×分子量/10 吸光度“A”有一个重要性质是其具有加和性: A=E IC,b1+ E 2C2b2+ E 3C3b3+ ∑:Cb 即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和。这是 多元混合物分光光度法定量分析的基础 若溶液中各溶质的吸光系数ε相同,则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例。 例如,离子交换柱层析分离核苷酸实验中可利用吸光度计算回收率 b m溶质的量 —溶质浓度 V——溶液体积A吸光度 e—吸光系数b吸收池光径 回收率n=m+m2+m+…=4+4y+4+ (100%) (上式中假设εg和各核苷酸的ε近似相等) 例一:尿嘧啶核苷酸溶液用lcm石英吸收池测定260nm处的吸光度为0.650,用 同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为0070,计算尿嘧啶溶液的摩尔浓度,已知其摩尔吸 光系数=82×103Mcm1(M=mol/L) A=(溶剂加样品的吸光度)一(溶剂的吸光度) ∴A=0.65 070=0.580 b=lcm ∴C=7.1×10-5mol/L 例二:1%(W/V,10mg/ml)酪氨酸酶溶液的吸光度为24.9(lcm吸收池, 280nm),计算A280=0.250的酪氨酸酶溶液的浓度。 由于这两种酶溶液的百分吸光系数“E1%1cm,280m”是相同的,因此可用正比例法 计算浓度 A A 2490.25 0.01%=0.1mg/ml 知 1%C133 L——液层厚度，吸收杯光径长度。 A——吸光度。 最大吸收波长λmax 时的ε 和 E 1% λmax 值可用下式换算： ε＝E 1% λmax×分子量 / 10 吸光度“A”有一个重要性质是其具有加和性： A＝ε1C1b1＋ε2C2b2＋ε3C3b3＋……＝ Cib n i  i =1 ε 即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和。这是 多元混合物分光光度法定量分析的基础。 若溶液中各溶质的吸光系数 ε 相同，则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例。 例如，离子交换柱层析分离核苷酸实验中可利用吸光度计算回收率： m＝C·V ， ∵ b A C ε ＝ ， ∴ b AV m ε ＝ m——溶质的量 C——溶质浓度 V——溶液体积 A——吸光度 ε——吸光系数 b——吸收池光径 ∴ 回收率 总 总 总 ＋ ＋ ＋ ＝ ＋ ＋ ＋ η＝ A V AV A V AV m m1 m2 m3  1 1 2 2 3 3  （100%） （上式中假设ε总和各核苷酸的ε近似相等） 例一：尿嘧啶核苷酸溶液用 1cm 石英吸收池测定 260nm 处的吸光度为 0.650，用 同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为 0.070，计算尿嘧啶溶液的摩尔浓度，已知其摩尔吸 光系数 = 8.2×103 M －1 cm －1（M＝mol / L）。 ∵ A＝ εbC ∵ A＝（溶剂加样品的吸光度）－（溶剂的吸光度） ∴ A＝0.650－0.070＝0.580 ∵ b＝1cm ∴ C==7.1×10－5 mol / L 例二：1%（W/V，10 mg / ml）酪氨酸酶溶液的吸光度为 24.9（1cm 吸收池， 280nm），计算 A280=0.250 的酪氨酸酶溶液的浓度。 由于这两种酶溶液的百分吸光系数“E 1%1cm，280nm”是相同的，因此可用正比例法 计算浓度。 ∵ 未知 未知 己知 己知 ＝ C A C A ∴ 未知 ＝ ％ C 0.25 1 24.9 ∴ C 未知＝0.01％＝0.1mg / ml