光系数或称消光系数)显著升高,此现象称为增色效应。此效应是由于碱基之间电子 相互作用的改变所致,通常在260nm处测量。 减色效应( hypochromic effect 在一定的条件下,变性的核酸又可以复性,此时ε值又明显减少,回复到原来的 核酸分子ε值较低的水平,即此时DNA或RNA溶液的紫外光吸收显著降低,此现象 称为减色效应,此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的,通常在 260nm条件下测量。 2.光吸收定律: 朗伯——比尔( Lam bert-beer)光吸收定律: A=-lgT=e b A-吸光度,又称光密度“OD” T透光度,T=1/I,I。—为照射到吸收池上的光强,I一为透过吸收池 的光强。 E—摩尔吸光系数或克分子吸光系数(L·mol-1·cm-1) —样品光程(cm),通常使用1.0cm的吸收地,b=lcm。 样品浓度(moL)。 由上式可以看出:吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正 摩尔吸光系数:ε A-c ,是物质对某波长的光的吸收能力的量度。ε越大 吸收光的能力越强,相应的分光度法测定的灵敏度就越高。ε值越大,说明电子跃迁 的几率大,通常ε=10~105:一般认为ε>104为强吸收;ε=103~10为较强吸 收:ε<102为弱吸收,此时分光光度法不灵敏。 因为通常使用分光光度计可检测出的最小吸光度A=0.001,所以,当b=1cm ε=105时,可检测的溶液最小浓度是C=108mol/L 常用的吸光系数还有一种百分吸光系数,即在某一波长下,溶液浓度为1%(W/ V),液层厚度b=lcm时的吸光度,以E1%,max表示 百分浓度(W/V)132 光系数或称消光系数）显著升高，此现象称为增色效应。此效应是由于碱基之间电子 相互作用的改变所致，通常在 260nm 处测量。 减色效应（hypochromic effect）: 在一定的条件下，变性的核酸又可以复性，此时ε值又明显减少，回复到原来的 核酸分子ε值较低的水平，即此时 DNA 或 RNA 溶液的紫外光吸收显著降低，此现象 称为减色效应，此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的，通常在 260nm 条件下测量。 2. 光吸收定律： 朗伯——比尔（Lambert－beer）光吸收定律： A＝－lgT＝εb c A——吸光度，又称光密度“O.D”。 T——透光度， T＝I / I。， I。——为照射到吸收池上的光强，I——为透过吸收池 的光强。 ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数（L·mol－1·cm－1）。 b——样品光程（cm），通常使用 1.0cm 的吸收地，b=1cm。 C——样品浓度（mol/L）。 由上式可以看出：吸光度 A 与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正 比。 摩尔吸光系数： bc A ε＝ ， 是物质对某波长的光的吸收能力的量度。ε越大， 吸收光的能力越强，相应的分光度法测定的灵敏度就越高。ε值越大，说明电子跃迁 的几率大，通常 ε＝10～105：一般认为ε＞ 104 为强吸收；ε＝103～104 为较强吸 收；ε＜ 102 为弱吸收，此时分光光度法不灵敏。 因为通常使用分光光度计可检测出的最小吸光度 A＝0.001, 所以，当 b＝1cm, ε＝105 时，可检测的溶液最小浓度是 C＝10-8 mol/L。 常用的吸光系数还有一种百分吸光系数，即在某一波长下，溶液浓度为 1%（W / V），液层厚度 b＝1cm 时的吸光度，以 E 1% λmax 表示。 CL A E 1％ λmax ＝ C——百分浓度（W / V）