五操作步骤 (一)出发菌株菌悬液的制备 1.出发菌株移接新鲜斜面培养基，37℃培养16-24h: 2.将活化后的菌株接种于液体培养基，37℃110pm振荡培养过夜（约16h),第二 天，以20-30%接种量转接新鲜的营养肉汤培养基，继续培养24h: 3.取4ml培养液与5ml离心管中，10000rpm离心35min,弃去上清液，加4ml无 菌生理盐水，重新悬浮菌体，再离心，弃去上清，重复上述步骤用生理盐水恢复 成菌悬液： 4.将上述菌悬液倒入装有小玻璃珠的无菌三角瓶内，振荡20-30min,以打散细胞： 5.取诱变前的0.5ml菌悬液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板 每一梯度倾注两皿，每皿加1ml菌液，37℃倒置培养2436h,进行平板菌落计数。 (二)UV诱变 1.将紫外灯打开，预热30min: 2.取直径6cm的无菌培养皿（含转子），加入南悬液5ml,控制细胞密度为1010 个ml: 3.将待处理的培养皿置于诱变箱内的磁力搅拌仪上，静止】分钟后开启磁力搅拌仪 旋纽进行搅拌，然后打开皿盖，分别处理5s、10s、15s、30s、45s,照射完毕后先 盖上皿盖，再关闭搅拌和紫外灯： 4.取0.5ml处理后的菌液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板进 行计数（避光培养）。 六实验结果 对平板菌落进行计数，并计算死亡率。 死亡率=照射前活菌数/ml-照射后活菌数/刚×1O0% 照射前活菌数/ml五 操作步骤 （一）出发菌株菌悬液的制备 1. 出发菌株移接新鲜斜面培养基，37℃培养 16~24h； 2. 将活化后的菌株接种于液体培养基，37℃ 110rpm 振荡培养过夜（约 16h），第二 天，以 20~30%接种量转接新鲜的营养肉汤培养基，继续培养 2~4h； 3. 取 4ml 培养液与 5ml 离心管中，10000rpm 离心 3~5min，弃去上清液，加 4ml 无 菌生理盐水，重新悬浮菌体，再离心，弃去上清，重复上述步骤用生理盐水恢复 成菌悬液； 4. 将上述菌悬液倒入装有小玻璃珠的无菌三角瓶内，振荡 20~30min，以打散细胞； 5. 取诱变前的 0.5ml 菌悬液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板， 每一梯度倾注两皿，每皿加 1ml 菌液，37℃倒置培养 24~36h，进行平板菌落计数。 （二）UV 诱变 1. 将紫外灯打开，预热 30min； 2. 取直径 6cm 的无菌培养皿（含转子），加入菌悬液 5ml，控制细胞密度为 107~108 个/ml； 3. 将待处理的培养皿置于诱变箱内的磁力搅拌仪上，静止 1 分钟后开启磁力搅拌仪 旋纽进行搅拌，然后打开皿盖，分别处理 5s、10s、15s、30s、45s，照射完毕后先 盖上皿盖，再关闭搅拌和紫外灯； 4. 取 0.5ml 处理后的菌液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板进 行计数（避光培养）。 六 实验结果 对平板菌落进行计数，并计算死亡率。 100% / / /  − = ml ml ml 照射前活菌数 照射前活菌数 照射后活菌数 死亡率