中国比较医学杂志2018年5月第28卷第5期 Chin J Comp Med,May2018,vl.28.N.5 下施用低剂量MPTP(20mg/kg,每周3次)3个月 可建立小鼠慢性PD模型。该模型死亡率低,黑质2转基因小鼠模型 纹状体DA神经元进行性退化,伴随着持续的神经 转基因模型主要是基于家族性PD相关基因的 炎症反应和运动缺陷,类似于PD的缓慢进行性神发现,迄今为止,已经鉴定了15个致病基因和超过 经变性过程。这种建模方式可能有助于建立不同25个遗传风险因子1,归类为“PARK”基因和“非 阶段的PD,更好地了解疾病的病理生理学,可用于PARK”基因。已经证明a- synuclein水平过表达,在 测试PD中的神经保护和修复治疗策略2。Pain病理发展中至关重要 等以评估了急性、亚急性和慢性的MPTP雄性2.1基因敲除模型 C57BL/6小鼠模型,结果显示各组中纹状体DA含 Nuytemans等3)研究发现PNKI(PTEN 量损失一致(约60%),而TH活性和DA能转运体 induced putative kinase1,PARK6)的约30种致病突 水平减少取决于MPTP的累积剂量。虽然急性和亚变与PD相关。然而,小鼠PINK1缺失不会导致明 急性中毒小鼠的中脑和海马5-羟色胺水平降低,但显的表型,迄今为止,开发的PNK1敲除(-)和敲 似乎不依赖于MPTP注射剂量,这与 rousselet等低小鼠模型显示轻度的神经退行性变化。 研究结果一致, Oliveras-Salva等研究显示重组腺相关病毒 在食蟹猴中,慢性和延长的MPTP给药(0.3( recombinant adeno-associated virus,rAAV)2/7载体 mg/kg,静脉注射,间歇性两年,2岁给药,10年后处介导的雌性C57BL6小鼠SN中PNK的敲低不会 死),在剩余的SN神经元胞体和神经纤维结构中发引起行为缺陷或DA细胞死亡、不增强α- synuclein 现a- synuclein积累、磷酸化的a- -synuclein免疫反应诱导的神经病理学变化,但是在PINˉ小鼠中 性,但无典型的LB发现]。猕猴连续低剂量[0.1a- synuclein诱导的DA能细胞死亡和磷酸化增强。 mg/(kgd)]MPTP皮下注射14d后可出现中度PDPM1小鼠SN中的DA神经元没有丧失,但纹 症状,此后隔日注射一次,4次后猕猴出现不可逆性状体中突触可塑性受损,表型仅显示总DA水平 PD运动症状,且可自主摄食并长期存活。李鹏的轻微降低。而Glas等在PIN1 等对猕猴后小腿皮下静脉缓慢注入MPP溶液C57BL/6J小鼠中观察到DA细胞的丧失、神经变性 0.2~0.4mg/kg,间隔1d,连续5次),3个月后评增加,表现为PD早期症状 估模型情况。虽然猕猴出现典型帕金森运动症状 钙离子非依赖型磷酸酯酶A2,Vla亚型 TH阳性纤维大量丧失,但未见到LB形成。史良琴( calcium- -independent phospholipase a2, group Vla, 等采用恒河猴小剂量、长时间前臂肌内注射iPLA2B)基因突变PL26发生于PD的多种神经 MPTP(0.2mg/kg,45d),动物可出现典型行为学症疾病中。 Blanchard等研究显示,雄性iPLA2B 状,且观察到LB形成。但该方法存在时间长,脉冲小鼠4个月时,神经病理学变化很小。12个月时, 式给药无法做到慢毒诱导,人为干扰大等因素。Ma小鼠出现运动障碍、小脑神经元损失和纹状体中α 等1对树齣连续腹腔注射MPTP[3mg/(kgd)],5 synuclein积累。15~20个月,该模型仍未出现PD d后出现典型的帕金森运动症状,且纹状体DA和特有的运动特征,仅显示神经炎症和PD相关的神 DOPA水平显著降低,脑中α- synuclein mRNA水平经病理学变化。 升高,提示树齣可能是研究PD发病机制的潜在动 Wang等4发现 tetranectin基因敲除C57BI6/J 物模型。邓苙等研究指出树齣MPP模型与6-小鼠(TN)与年龄匹配的WT小鼠相比,12个月 OHDA模型相比,PD行为学特征更明显,树齣的TH时,SNc中具有较少的DA神经元。DAT、二羟苯乙 阳性神经细胞呈双侧性减少,提示MPTP经腹腔注酸水平升高,意味着小鼠纹状体DA能终端的代偿 射是制备树齣PD模型的理想方法。 性增加。小鼠运动迟缓、旋转速度变慢,运动功能 与灵长类动物相比,啮齿动物对MPTP毒性的逐渐恶化,伴有中度至重度肢体僵硬和异常姿势, 敏感性较低,白老鼠几乎不受MPP的影响,MPTP并且无自发行为恢复。两种基因型老年小鼠(>18 限制在黑色小鼠或灵长类的PD动物模型中。急个月)的SN中a- synuclein免疫反应性均增加,但 性MPTP给药主要引起DA能神经细胞非凋亡性死TN小鼠反应更明显,形成LB样物质。老年 亡,而长期施用低至中等剂量的神经毒素导致由凋TN′小鼠的纹状体α synuclein水平显著降低。该 亡性细胞死亡引起的进行性的神经变性,可以反映模型可能是研究LB形成、检测PD神经保护疗法或 PD患者大脑中的细胞分子生物学变化。 其他突触核蛋白病的有价值的模型。下施用低剂量 ＭＰＴＰ（２０ ｍｇ ／ ｋｇ，每周 ３ 次）３ 个月， 可建立小鼠慢性 ＰＤ 模型。 该模型死亡率低，黑质 纹状体 ＤＡ 神经元进行性退化，伴随着持续的神经 炎症反应和运动缺陷，类似于 ＰＤ 的缓慢进行性神 经变性过程。 这种建模方式可能有助于建立不同 阶段的 ＰＤ，更好地了解疾病的病理生理学，可用于 测试 ＰＤ 中的神经保护和修复治疗策略［２４］ 。 Ｐａｉｎ 等［２５］ 评估了急性、 亚急性和慢性的 ＭＰＴＰ 雄 性 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠模型，结果显示各组中纹状体 ＤＡ 含 量损失一致（约 ６０％ ），而 ＴＨ 活性和 ＤＡ 能转运体 水平减少取决于 ＭＰＴＰ 的累积剂量。 虽然急性和亚 急性中毒小鼠的中脑和海马 ５⁃羟色胺水平降低，但 似乎不依赖于 ＭＰＴＰ 注射剂量，这与 Ｒｏｕｓｓｅｌｅｔ 等［２６］ 研究结果一致。 在食蟹猴中，慢性和延长的 ＭＰＴＰ 给药（０􀆰 ３ ｍｇ ／ ｋｇ，静脉注射，间歇性两年，２ 岁给药，１０ 年后处 死），在剩余的 ＳＮ 神经元胞体和神经纤维结构中发 现 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 积累、磷酸化的 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 免疫反应 性，但无典型的 ＬＢ 发现［２７］ 。 猕猴连续低剂量［０􀆰 １ ｍｇ ／ （ｋｇ·ｄ）］ＭＰＴＰ 皮下注射 １４ ｄ 后可出现中度 ＰＤ 症状，此后隔日注射一次，４ 次后猕猴出现不可逆性 ＰＤ 运动症状，且可自主摄食并长期存活［２８］ 。 李鹏 等［２９］对猕猴后小腿皮下静脉缓慢注入 ＭＰＴＰ 溶液 （０􀆰 ２ ～ ０􀆰 ４ ｍｇ ／ ｋｇ，间隔 １ ｄ，连续 ５ 次），３ 个月后评 估模型情况。 虽然猕猴出现典型帕金森运动症状、 ＴＨ 阳性纤维大量丧失，但未见到 ＬＢ 形成。 史良琴 等［３０］采用恒河猴小剂量、 长时间前臂肌内注射 ＭＰＴＰ（０􀆰 ２ ｍｇ ／ ｋｇ，４５ ｄ），动物可出现典型行为学症 状，且观察到 ＬＢ 形成。 但该方法存在时间长，脉冲 式给药无法做到慢毒诱导，人为干扰大等因素。 Ｍａ 等［３１］对树鼩连续腹腔注射 ＭＰＴＰ［３ ｍｇ ／ （ｋｇ·ｄ）］，５ ｄ 后出现典型的帕金森运动症状，且纹状体 ＤＡ 和 ＤＯＰＡ 水平显著降低，脑中 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ ｍＲＮＡ 水平 升高，提示树鼩可能是研究 ＰＤ 发病机制的潜在动 物模型。 邓苙等［３２］ 研究指出树鼩 ＭＰＴＰ 模型与 ６⁃ ＯＨＤＡ 模型相比，ＰＤ 行为学特征更明显，树鼩的 ＴＨ 阳性神经细胞呈双侧性减少，提示 ＭＰＴＰ 经腹腔注 射是制备树鼩 ＰＤ 模型的理想方法。 与灵长类动物相比，啮齿动物对 ＭＰＴＰ 毒性的 敏感性较低，白老鼠几乎不受 ＭＰＰ ＋ 的影响，ＭＰＴＰ 限制在黑色小鼠或灵长类的 ＰＤ 动物模型中［８］ 。 急 性 ＭＰＴＰ 给药主要引起 ＤＡ 能神经细胞非凋亡性死 亡，而长期施用低至中等剂量的神经毒素导致由凋 亡性细胞死亡引起的进行性的神经变性，可以反映 ＰＤ 患者大脑中的细胞分子生物学变化［３３］ 。 ２ 转基因小鼠模型 转基因模型主要是基于家族性 ＰＤ 相关基因的 发现，迄今为止，已经鉴定了 １５ 个致病基因和超过 ２５ 个遗传风险因子［３４］ ，归类为“ ＰＡＲＫ”基因和“非 ＰＡＲＫ”基因。 已经证明 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 水平过表达，在 病理发展中至关重要。 ２􀆰 １ 基因敲除模型 Ｎｕｙｔｅｍａｎｓ 等［３５］ 研 究 发 现 ＰＩＮＫ１ （ ＰＴＥＮ⁃ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｋｉｎａｓｅ １，ＰＡＲＫ６） 的约 ３０ 种致病突 变与 ＰＤ 相关。 然而，小鼠 ＰＩＮＫ１ 缺失不会导致明 显的表型，迄今为止，开发的 ＰＩＮＫ１ 敲除（ － ／ － ）和敲 低小 鼠 模 型 显 示 轻 度 的 神 经 退 行 性 变 化［３６］ 。 Ｏｌｉｖｅｒａｓ⁃Ｓａｌｖá 等［３７］ 研 究 显 示 重 组 腺 相 关 病 毒 （ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ，ｒＡＡＶ）２ ／ ７ 载体 介导的雌性 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠 ＳＮ 中 ＰＩＮＫ１ 的敲低不会 引起行为缺陷或 ＤＡ 细胞死亡、不增强 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 诱导的神经病理学变化，但是在 ＰＩＮＫ１ － ／ － 小鼠中 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 诱导的 ＤＡ 能细胞死亡和磷酸化增强。 ＰＩＮＫ１ － ／ － 小鼠 ＳＮ 中的 ＤＡ 神经元没有丧失，但纹 状体中突触可塑性受损［３８］ ，表型仅显示总 ＤＡ 水平 的 轻 微 降 低［３９］ 。 而 Ｇｌａｓｌ 等［４０］ 在 ＰＩＮＫ１ － ／ － Ｃ５７ＢＬ ／ ６ Ｊ 小鼠中观察到 ＤＡ 细胞的丧失、神经变性 增加，表现为 ＰＤ 早期症状。 钙离 子 非 依 赖 型 磷 酸 酯 酶 Ａ２， ＶＩａ 亚 型 （ｃａｌｃｉｕｍ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２， ｇｒｏｕｐ ＶＩａ， ｉＰＬＡ２β）基因突变 ＰＬＡ２Ｇ６ 发生于 ＰＤ 的多种神经 疾病中。 Ｂｌａｎｃｈａｒｄ 等［４１］研究显示，雄性 ｉＰＬＡ２β － ／ － 小鼠 ４ 个月时，神经病理学变化很小。 １２ 个月时， 小鼠出现运动障碍、小脑神经元损失和纹状体中 α⁃ ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 积累。 １５ ～ ２０ 个月，该模型仍未出现 ＰＤ 特有的运动特征，仅显示神经炎症和 ＰＤ 相关的神 经病理学变化。 Ｗａｎｇ 等［４２］发现 ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ 基因敲除 Ｃ５７ＢＬ６ ／ Ｊ 小鼠（ＴＮ － ／ － ）与年龄匹配的 ＷＴ 小鼠相比，１２ 个月 时，ＳＮｃ 中具有较少的 ＤＡ 神经元。 ＤＡＴ、二羟苯乙 酸水平升高，意味着小鼠纹状体 ＤＡ 能终端的代偿 性增加。 小鼠运动迟缓、旋转速度变慢，运动功能 逐渐恶化，伴有中度至重度肢体僵硬和异常姿势， 并且无自发行为恢复。 两种基因型老年小鼠（ ＞ １８ 个月）的 ＳＮ 中 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 免疫反应性均增加，但 ＴＮ － ／ － 小鼠 反 应 更 明 显， 形 成 ＬＢ 样 物 质。 老 年 ＴＮ － ／ － 小鼠的纹状体 α⁃ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ 水平显著降低。 该 模型可能是研究 ＬＢ 形成、检测 ＰＤ 神经保护疗法或 其他突触核蛋白病的有价值的模型。 中国比较医学杂志 ２０１８ 年 ５ 月第 ２８ 卷第 ５ 期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ， Ｍａｙ ２０１８，Ｖｏｌ． ２８． Ｎｏ． ５ ２３