第7卷第3期 上海水产大学学报 Vol.7,No.3 1998年9月 JOURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNIVERSITY Sep.1998 21-2 94,411 草鱼出血病病毒减毒的研究 许淑英李焕林邓国成姜兰白岳强 (中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380 摘要草鱼出血病病毒GCHV-892野毒株在PSF细胞连续传代过程,于培养液中加入一 定浓度的按液,传至19代已达减毒目的。继续传至29代其减毒效果保持稳定27代后不再加入按 液,继续传至37代其减毒效果仍然保持稳定不变。致弱病毒对草鱼的安全性好免疫原性强用该 弱毒株制备的弱毒疫苗免疫草鱼后,草鱼的成活率和免疫保护率均达100%表明液是草鱼出血 病病毒的一种良好减毒剂。经按液减毒的GCHA-892是一株良好的减毒株。 关键词草鱼出血病病毒,液减毒 中国分类号 S94 草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国传统的优质养殖鱼类养殖面积广但其鱼种阶段 易受出血病危害,成活率低。草鱼出血病是一种病毒性疾病,免疫预防是该病最有效的防治方 法。作者对草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗进行了多年的研究,现已成功地研制出免疫效果良好 的弱毒疫苗[许淑英等1994]弱毒疫苗的研制关键是要将强毒株进行减毒,最后筛选出安全 性好、免疫原性强的弱毒株。弱毒株可以通过不同途径和方法获得[章以浩等1966, Kisary 1978]几年来,作者对草鱼出血病病毒株进行了减毒研究现将结果综合报道如下。 1材料和方法 1.1病毒 具有强毒力的GCHV-892野毒株(下称892株来源于珠江三角洲池塘出现典型病症的草 鱼肝、脾、肾组织,取样后作如下处理:剪碎、浆后用不含小牛血清的199培养液稀释10倍, 置冰箱4℃预冷用10000m离心20分钟,上清液即为除菌组织病毒液经无菌检验后即可用 于本试验。 1.2细胞 由本所建立的草鱼吻端成纤维细胞系PSF是对草鱼出血病病毒敏感的细胞系(李焕林等 1988)将细胞培养于含10%小牛血清的199养液(日本产培养基中待细胞长成致密单层后 1998-06-01收到 (1)李焕林,许英邓国成等,198.草鱼吻端成纤维细胞系PSF的建立及其生物学特性,中国水产科学研究院学报, (1):1~8第 7卷第 3期 1998年 9月 上 海 水 产 大 学 学 报 JOURNAL OF SHANG HAIFISH ERIES U NIVERSITY Vo1．7． No．3 sep．t1998 三 {}一 草鱼出血病病毒减毒的研究 L许— — —淑— — 英一 李— — 焕— — — 一 邓国成 姜 兰 白岳强 (中国水 产科 学研 究 院珠江 水 产研 究所 t广州 510380) 摘 要 草 鱼 出血病 病毒 GCHV一892野 毒株 在 PSF细胞 连 续 传代过 程 ，于 培养 液 中 加入 一 定 浓度 的桉 液 ．传 至 l9代 已选 减 毒 目的 。继 续 传 至 29代其 减 毒 效 果保 持 稳 定 。27代 后 不 再 加 入桉 液，继续传至37代其减毒效果仍然保持稳定不变。致弱病毒对草 鱼的安全性好+免疫原性强 。用该 弱毒 株制 备 的弱毒 疫苗 免 疫草 鱼 后 ，草 鱼 的成 活率 和 免疫 保 护率 均选 100％ 。表 明桉液 是 草 鱼 出血 病痛 毒 的一种 良好 减毒 剂 。经按 液 减毒 的 GCHAV一892是 一株 良好 的减 毒 株 。 关键 调 草 鱼 ，出血病病 毒 ，柱 液 ，减 毒 中 圈分 类号 $94 草 鱼(Ctenopharyngodonidella)是 我 国传 统的优质养 殖鱼类 ，养 殖面积 广 。但其 鱼种 阶段 易受出血病危 害 ，成 活率低 。草鱼 出血病是 一种病毒性疾 病 ，免疫预 防是该病 最有效 的 防治 方 法 。作者对草鱼 出血病 细胞培养弱毒 疫苗进行 了多年 的研 究 ，现 己成功地研制 出免 疫效 果 良好 的弱毒疫苗[许 淑英 等 1994]弱毒疫 苗的研 制关键 是要 将强毒 株进行 减 毒 ，最 后筛选 出安 全 性 好、免 疫原性 强 的弱 毒 株 。弱毒 株 可 以通过 不 同途 径 和 方 法获 得 [章 以浩 等 1966，Kisary 1978]。几 年来 ，作者 对草鱼 出血病病毒 株进行 了减毒研究 。现将 结果 综合报道如下 。 1 材料和方法 1．1 病 毒 具 有强毒力 的 GCHV一892野毒株 (下称892株 )来源于珠江 三角洲 池塘 出现 典型病症 的草 鱼肝 、脾 、肾组 织 ，取样 后作如 下处理 ：剪 碎 、匀浆 后用不含 小牛血 清 的199培养液 稀 释10 倍 ， 置冰 箱4"C预冷 。JTJ100O0rpm 离 L,20分钟 ，上清液 即为 除菌组织病 毒液 ，经无 菌检验后 即可用 于本试验 。 1．2 细胞 由本所建立 的草 鱼吻端 成纤 维细胞 系 PSF是对草 鱼出血病 病毒 敏感 的细胞 系(李焕林 等 1988)。将细胞培养于含 10 小牛 血清 的199培养液 (日本 产培 养基 )中 ，待细胞长成致密单层后 1998— 06— 01收 到 (1)李焕 林 ，许 嘏英 ，邓 国成 等．1988．草鱼 吻端成耋千维 细胞 系 PSF的建 立及其 生物学 特性 ．中国 水产科 学研究 院学报 (1)，1～ 8． 维普资讯 http://www.cqvip.com