微生物通常是肉眼看不到的微小生物,而且无处不在。因此,在微生物的研究及应用中, 不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物,而且还必须随时 注意保持微生物纯培养物的“纯洁”,防止其他微生物的混入。在分离、转接及培养纯培养 物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术( aseptic technique),它是保证微 生物学研究正常进行的关键。 1.微生物培养的常用器具及其灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿( culture dish, Petri dish)等是最为常用的培养微生物的 器具,在使用前必须先行灭菌,使容器中不含任何生物。培养微生物的营养物质(称为培养 基( culture medium))可以加到器皿中后一起灭菌,也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休 眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌 为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常 采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微 生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成,这种器具是专为防止空气中微生物的污 染而设计的 2.接种操作 用接种环或接种针分离微生物,或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个 培养容器进行培养,是微生物学研究中最常用的基本操作。由于打开器皿就可能引起器皿内 部被环境中的其他微生物污染,因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行,其要点 是在火焰附近进行熟练的无菌操作(图2-1),或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操 作(图2-2)。操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时间内用紫外灯或化学药剂灭菌。 有的无菌室通无菌空气维持无菌状态 用以挑取和转接微生物材料的接种环及接种针,一般采用易于迅速加热和冷却的镍铬合 金等金属制备,使用时用火焰灼烧灭菌。而移植液体培养物可采用无菌吸管或移液枪 二、用固体培养基分高纯培养 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见 的、有一定形态结构的子细胞生长群体,称为菌落( colony)。当固体培养基表面众多菌落 连成一片时,便成为菌苔(lawn)。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般 都具有稳定的特征,可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据(图2-3)。大多数细 菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落,采用适宜的平 板分离法很容易得到纯培养。所谓平板,即培养平板( culture plate)的简称,它是指固 体培养基倒入无菌平皿,冷却凝固后,盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离 和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基,每个孤 立的活微生物体生长、繁殖形成菌落,形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的 固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术 简便易行,100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 1.稀释倒平板法( pour plate method.)微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。因此，在微生物的研究及应用中， 不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时 注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。在分离、转接及培养纯培养 物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术（aseptic technique），它是保证微 生物学研究正常进行的关键。 1. 微生物培养的常用器具及其灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿（culture dish，Petri dish）等是最为常用的培养微生物的 器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不含任何生物。培养微生物的营养物质（称为培养 基（culture medium））可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休 眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。 为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常 采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微 生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污 染而设计的。 2. 接种操作 用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个 培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。由于打开器皿就可能引起器皿内 部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点 是在火焰附近进行熟练的无菌操作（图 2-1），或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操 作（图 2-2）。操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时间内用紫外灯或化学药剂灭菌。 有的无菌室通无菌空气维持无菌状态。 用以挑取和转接微生物材料的接种环及接种针，一般采用易于迅速加热和冷却的镍铬合 金等金属制备，使用时用火焰灼烧灭菌。而移植液体培养物可采用无菌吸管或移液枪。 二、用固体培养基分离纯培养 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见 的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落（colony）。当固体培养基表面众多菌落 连成一片时，便成为菌苔（lawn）。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般 都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据（图 2-3）。大多数细 菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平 板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板（culture plate）的简称，它是指固 体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离 和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤 立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的 固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由 Kock 建立的采用平板分离微生物纯培养的技术 简便易行，100 多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 1. 稀释倒平板法（pour plate method）