分析该菌株的耐药机制。可从表型和基因型分析菌株是否表达B-内酰胺酶、用聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分析该耐药菌的外膜蛋白与 标准菌相比有无差异表达、PC扩增分析有无该外排泵的基因型、通过外排泵协同抑制 实验进一步分析菌株中是否有外排泵的过表达、以及整合子的基因型分析这一系列实验 来明确该菌株中所具有的耐药机制。同时，从分子水平着手，通过电击转化方法将一段己 知序列的转座子插入到细菌的基因组中，通过表型筛选获得突变株。获得含有转座子及 其两侧的序列的片段，并将这段片段转入大肠杆菌中。筛选得到阳性克隆，再通过反式 PC技术获得转座子两侧的序列以分析细菌有可能的耐药机制。 [1]潘劲草，刘克洲整合子在革兰阴性菌获得性耐药形成机制中的作用U国外医学流 行病学传染学分册，2004,31(5)：289-291. [2]Xiong ZZ,Zhu DM,Wang FA.Klebsiella pneumoniaeproducing three kinds of class AB-lactamases encoded by single plasmid iso-lated from a patient in Huashan Hospital,Shanghai,China[J].Int J Antimicrob Agents,2004,23(3):262-267. [3]Rosser SJ,Young HK.Identification and characterization ofclass 1 integrons in bacteria from an aquatic environment[J].J Antimicrob Chemother,1999,44(1):11-18. [4]Rowe-Magnus DA,Guerout AM,Mazel D.Bacterial resist-ance evolution by recruitment of super-integron gene cassettes[J].Mol Microbiol,2002,43(6):1657-1669. [5]Leverstein-van Hall MA,Blok MHE,Donders TAR,et al.Multidrug resistance among Enterobacteriaceae is strongly as-sociated with the presence of integrons and is independent of species or isolate origin[].J Infect Dis,2003,187(2):251-259 [6) Tsakris A,Pournaras S,Woodford N,etal.Outbreak of in-fections caused byPseudomonas aerugiosaproducing VIM-1carbapenemase in Greece[J].J Clin Microbiol,2000,38(3:1290-1292. [7)曹彬，王辉，朱元珏，等.多药耐药铜绿假单胞菌医院感染危险因素及预后因素分析). 中华结核和呼吸杂志，2004,27(1)：31-35 [8)王辉，陈民钧.碳青酶烯酶：未来困扰我们的难题).中华内科杂 志，2003,42(5)：354-356. [9]赵云峰，罗永艾.耐药结核病的现状及防治).中国实用内科杂志，2004,24(8)：451-454. [10]Yu WL,Chuang YC,Jones RN.A pragmatic approach toidentify extended-spectrum beta-lactamase-producingKleb-siella pneumoniaein Taiwan:in vitroactivity of newer andestablished antimicrobial agents[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2004,48(4):277-282. [11] Ubukata K,Nonoguchi R,Matschashi M,et al.Expressionand inducibility inStaphylococcus aureusof the meca gene,which encodes a methicillin-resistantS.aureus-specificpeni-cillin-bindingprotein[J].JBacteriol,1989,171( 5):2882-2885. [12]马越，李景云，姚蕾，等.住院患者分离的金黄色葡萄球菌耐药率比较分析].中华医 学杂志，2003,83(5)382-384. [13]Murray BE.Vancomycin-resistant enterococcal infections[J].N Engl J Med,2000,342(10):710-721. [14]沈洪.急诊危重病合并感染的降阶梯治疗策略U].中国危重病急救医 学，2004,14(8)：451-452. [15]孟甄，金建玲，刘玉庆，等.细菌耐药性的诱导与消除.中华药理学通分析该菌株的耐药机制。可从表型和基因型分析菌株是否表达β-内酰胺酶、用聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分析该耐药菌的外膜蛋白与 标准菌相比有无差异表达、PCR 扩增分析有无该外排泵的基因型、通过外排泵协同抑制 实验进一步分析菌株中是否有外排泵的过表达、以及整合子的基因型分析这一系列实验 来明确该菌株中所具有的耐药机制。同时,从分子水平着手,通过电击转化方法将一段已 知序列的转座子插入到细菌的基因组中,通过表型筛选获得突变株。获得含有转座子及 其两侧的序列的片段,并将这段片段转入大肠杆菌中。筛选得到阳性克隆,再通过反式 PCR 技术获得转座子两侧的序列以分析细菌有可能的耐药机制。 [1] 潘劲草,刘克洲.整合子在革兰阴性菌获得性耐药形成机制中的作用[J].国外医学流 行病学传染学分册,2004,31(5):289-291. [2] Xiong ZZ, Zhu DM, Wang FA.Klebsiella pneumoniaeproducing three kinds of class Aβ-lactamases encoded by single plasmid iso-lated from a patient in Huashan Hospital,Shanghai,China[J].Int J Antimicrob Agents,2004,23(3):262-267. [3] Rosser SJ, Young HK.Identification and characterization ofclass 1 integrons in bacteria from an aquatic environment[J].J Antimicrob Chemother,1999,44(1):11-18. [4] Rowe-Magnus DA,Guerout AM,Mazel D.Bacterial resist-ance evolution by recruitment of super-integron gene cassettes[J].Mol Microbiol,2002,43(6):1657-1669. [5] Leverstein-van Hall MA,Blok MHE,Donders TAR,et al.Multidrug resistance among Enterobacteriaceae is strongly as-sociated with the presence of integrons and is independent of species or isolate origin[J].J Infect Dis,2003,187(2):251-259. [6] Tsakris A, Pournaras S, Woodford N, etal. Outbreak of in-fections caused byPseudomonas aerugiosaproducing VIM-1carbapenemase in Greece[J].J Clin Microbiol,2000,38(3):1290-1292. [7] 曹彬,王辉,朱元珏,等.多药耐药铜绿假单胞菌医院感染危险因素及预后因素分析[J]. 中华结核和呼吸杂志,2004,27(1):31-35. [8] 王 辉 , 陈 民 钧 . 碳 青 酶 烯 酶 : 未 来 困 扰 我 们 的 难 题 [J]. 中 华 内 科 杂 志,2003,42(5):354-356. [9] 赵云峰,罗永艾.耐药结核病的现状及防治[J].中国实用内科杂志,2004,24(8):451-454. [10] Yu WL, Chuang YC, Jones RN.A pragmatic approach toidentify extended-spectrum beta-lactamase-producingKleb-siella pneumoniaein Taiwan:in vitroactivity of newer andestablished antimicrobial agents[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2004,48(4):277-282. [11] Ubukata K,Nonoguchi R,Matschashi M,et al.Expressionand inducibility inStaphylococcus aureusof the mecA gene,which encodes a methicillin-resistantS.aureus-specificpeni-cillin-bindingprotein[J].JBacteriol,1989,171( 5):2882-2885. [12] 马越,李景云,姚蕾,等.住院患者分离的金黄色葡萄球菌耐药率比较分析[J].中华医 学杂志,2003,83(5):382-384. [13] Murray BE.Vancomycin-resistant enterococcal infections[J].N Engl J Med,2000,342(10):710-721. [14] 沈 洪 . 急 诊 危 重 病 合 并 感 染 的 降 阶 梯 治 疗 策 略 [J]. 中 国 危 重 病 急 救 医 学,2004,14(8):451-452. [15] 孟 甄 , 金 建 玲 , 刘 玉 庆 , 等 . 细 菌 耐 药 性 的 诱 导 与 消 除 [J]. 中 华 药 理 学 通