生物化学:核酸的生物合成 山农大生物化学与分子生物学系第4页共14页 具有5→3聚合活力,较弱,3→5外切活性。但无5→3外切活性 ⑧DNA聚合酶Ⅲ(寡聚酶) 是催化大肠杆菌DNA复制的主酶 全酶有10种亚基,含Zn a亚基有5→3聚合活力 e亚基有3’→5’外切活性 形成 →>低活性的核心或 polly 0刺激e的3’→5外切活力 β亚基大约把酶的核心夹于模板上,从而提高全酶的工作能力。 ④DNA聚合酶IV和V 与DNA的修复有关。(1999鉴定) 2、引发酶和引发体 所有DNA聚合E都只能在模板链指令下,在引物(通常为RNA)3′-OH端添加 新核苷酸(延伸新链)功能,没有从头合成活力。 引发酶合成一小段RNA引物(有游离的3′-0H),作为DNA合成的引物 引发酶为一条单链多肽,单独存在时相当不活泼,只有与几种辅助蛋白组装成 引发体,才有合成引物活性。 3、DNA连接藤 催化双链DNA中一条链上缺口的共价连接,形成3′,5′—一磷酸二酯键。缺 口上的3′一0H,5′一磷酰基必须相邻。如果缺少一个或几个核苷酸残基,连接酶 不能将缺口弥合。也不能将两条游离的单链连接起来。需要消耗能量,大肠杆菌 NAD’,真核细胞ATP。 4、DNA解螺旋酶 DNA双螺旋在复制和修复中都必须解链,以便提供单链DNA模板。催化DNA双 螺旋解链,都有依赖双链DNA的 ATPase活性。水解ATP提供解链所需能量。 5、单链DNA结合蛋白 SSB结合蛋白的作用: DNA双螺旋经解螺旋酶解链形成的单链很快被SB所覆盖。 ①保护单链DNA免遭核酸的降解,使单链DNA保持伸展态,以便作为模板。 ②降低DMA的Tm,促进DNA解链。原核细胞SSB有协同效应,真核细胞无 协同效应:先结合到已存在的单链区,其后的SSB的结合能力可提高10倍,表现出协同效应生物化学: 核酸的生物合成 山农大生物化学与分子生物学系 第 4 页 共 14 页 4 具有 5’→3’聚合活力，较弱，3’→5’外切活性。但无 5’→3’外切活性。 ③DNA 聚合酶 Ⅲ（寡聚酶） 是催化大肠杆菌 DNA 复制的主酶 全酶有 10 种亚基，含 Zn2+ β亚基大约把酶的核心夹于模板上，从而提高全酶的工作能力。 ④DNA 聚合酶 IV 和 V 与 DNA 的修复有关。 （1999 鉴定） 2、引发酶和引发体 所有 DNA 聚合 E 都只能在模板链指令下，在引物（通常为 RNA）3′－OH 端添加 新核苷酸（延伸新链）功能，没有从头合成活力。 引发酶合成一小段 RNA 引物（有游离的 3′－OH），作为 DNA 合成的引物。 引发酶为一条单链多肽，单独存在时相当不活泼，只有与几 种辅助蛋白组装成 引发体，才有合成引物活性。 3、DNA 连接酶 催化双链 DNA 中一条链上缺口的共价连接，形成 3ˊ，5ˊ－－磷酸二酯键。缺 口上的 3′－OH，5ˊ－磷酰基必须相邻。如果缺少一个或几个核苷酸残基，连接酶 不能将缺口弥合。也不能将两条游离的单链连接起来。需要消耗能量，大肠杆菌 NAD+ ，真核细胞 ATP。 4、DNA 解螺旋酶 DNA 双螺旋在复制和修复中都必须解链，以便提供单链 DNA 模板。催化 DNA 双 螺旋解链，都有依赖双链 DNA 的 ATPase 活性。水解 ATP 提供解链所需能量。 5、单链 DNA 结合蛋白 SSB 结合蛋白的作用： DNA 双螺旋经解螺旋酶解链形成的单链很快被 SSB 所覆盖。 ①保护单链 DNA 免遭核酸的降解，使单链 DNA 保持伸展态，以便作为模板。 ②降低 DNA 的 Tm，促进 DNA 解链。原核细胞 SSB 有协同效应，真核细胞无。 协同效应：先结合到已存在的单链区，其后的 SSB 的结合能力可提高 103 倍，表现出协同效应。 ΠΙ → → → ⎯⎯ →⎯ ⎪⎭ ⎪ ⎬ ⎫ 低活性的核心或pol 形成 θ刺激ε的3' 5'外切活力 ε亚基有3' 5'外切活性 a亚基有5' 3'聚合活力