54 实训一 花生中黄曲霉毒素 B1的检测 一、目的 1、熟练掌握薄层层析法原理。 2、掌握薄层层析操作作方法。 二、原理 样品中黄曲霉毒素 B1经有机溶剂提取，浓缩、净化以及薄层分离前处理后， 在波长 365nm 紫外光下产生兰紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检 出量来测定含量。 三、试剂 1．三氯甲烷、甲醇、苯、乙腈、丙酮 2．正己烷（沸程 30～60℃）或石油醚（沸程 60～90℃）. 3．无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水 4．苯――乙腈（98：2）混合溶液：量取 98ml 苯，加 2ml 乙腈，混匀。 5．甲醇――水（55：45）溶液：配制方法同上。 6．三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠 7．硅胶 G，薄层色谱用。 8．AFTB1 标准溶液的制备：用百万分之一的微量分析天平精密称取 1～ 1.2mgAFTB1标准品，先加入 2ml 乙腈溶解后，再用苯稀释至 100ml。然后避光 置于 4℃冰箱中保存。最后进行 AFTB1标准溶液浓度的测定。（此标准溶液浓度 为 10μg/ml）。 9．AFTB1标准使用液Ⅰ：精密吸取 1ml10μg/ml 标准溶液于 10ml 容量瓶中， 加苯－乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液浓度为 1μg/ml。 10．AFTB1标准使用液Ⅱ：精密吸取 1.0ml1μg/mlAFTB1标准使用液Ⅰ于 5ml 容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 0.2μg/ml。 11．AFTB1标准使用液Ⅲ：精密吸取 1.0mlAFTB1标准使用液Ⅱ于 5ml 容量瓶 中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 0.04μg/ml。 12．50/L 次氯酸钠溶液：取 100g 漂白精，加入 500ml 水，搅拌均匀。另将 160g 工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于 500ml 温水中，再将两液混合，搅拌， 澄清后，再过滤即可。 四、仪器和用具 1．小型粉碎机、样筛、电动振荡器 2．全玻璃浓缩器、电子恒温水浴锅、薄层板涂布器 3．玻璃板：5cm×20cm。 4．展开槽：内长 25cm，宽 6cm，高 4cm。 5．紫外光灯：100～125W，带有波长 365nm 滤光片 6．微量进样器、蒸发器：50ml 五、操作步骤 1．样品提取、净化54 实训一 花生中黄曲霉毒素 B1的检测 一、目的 1、熟练掌握薄层层析法原理。 2、掌握薄层层析操作作方法。 二、原理 样品中黄曲霉毒素 B1经有机溶剂提取，浓缩、净化以及薄层分离前处理后， 在波长 365nm 紫外光下产生兰紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检 出量来测定含量。 三、试剂 1．三氯甲烷、甲醇、苯、乙腈、丙酮 2．正己烷（沸程 30～60℃）或石油醚（沸程 60～90℃）. 3．无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水 4．苯――乙腈（98：2）混合溶液：量取 98ml 苯，加 2ml 乙腈，混匀。 5．甲醇――水（55：45）溶液：配制方法同上。 6．三氟乙酸、无水硫酸钠、氯化钠 7．硅胶 G，薄层色谱用。 8．AFTB1 标准溶液的制备：用百万分之一的微量分析天平精密称取 1～ 1.2mgAFTB1标准品，先加入 2ml 乙腈溶解后，再用苯稀释至 100ml。然后避光 置于 4℃冰箱中保存。最后进行 AFTB1标准溶液浓度的测定。（此标准溶液浓度 为 10μg/ml）。 9．AFTB1标准使用液Ⅰ：精密吸取 1ml10μg/ml 标准溶液于 10ml 容量瓶中， 加苯－乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液浓度为 1μg/ml。 10．AFTB1标准使用液Ⅱ：精密吸取 1.0ml1μg/mlAFTB1标准使用液Ⅰ于 5ml 容量瓶中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 0.2μg/ml。 11．AFTB1标准使用液Ⅲ：精密吸取 1.0mlAFTB1标准使用液Ⅱ于 5ml 容量瓶 中，加苯－乙腈混合液稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 0.04μg/ml。 12．50/L 次氯酸钠溶液：取 100g 漂白精，加入 500ml 水，搅拌均匀。另将 160g 工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于 500ml 温水中，再将两液混合，搅拌， 澄清后，再过滤即可。 四、仪器和用具 1．小型粉碎机、样筛、电动振荡器 2．全玻璃浓缩器、电子恒温水浴锅、薄层板涂布器 3．玻璃板：5cm×20cm。 4．展开槽：内长 25cm，宽 6cm，高 4cm。 5．紫外光灯：100～125W，带有波长 365nm 滤光片 6．微量进样器、蒸发器：50ml 五、操作步骤 1．样品提取、净化