(二)细菌的生理生化反应(VR.试验、甲基红试验) 一、目的要求 了解细菌鉴定中常用的主要生理生化反应试验法及其原理。 二、实验材料 L.菌种：大肠杆菌(E.coli)、产气杆菌(Enterobacter aerogenes) 培养基：葡萄糖蛋白陈水培养基 3. 试剂：甲基红试剂，40%NaOH溶液，肌酸 三、基本原理 大肠杆菌和产气杆菌均为革兰氏阴性杆菌，大肠杆菌是肠道寄生茵，产气杆茵广泛存在 自然界中，因此检查水时要将两者分开。 VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。 丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成 二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即VP反应为阳性。产气 杆菌VP反应为阳性。 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代 谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色(p6.3)变 为红色(pH4.2)即甲基红反应为阳性。大肠杆菌甲基红反应为阳性 四、操作步骤 (一)VP试验 1,试管标记取3支装有葡萄糖蛋白陈水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气杆菌和 空白对照。 2 接种培养以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白不接菌。置37℃恒 温箱中，培养2448 3. 观察记录取出以上试管，振荡2mi,另取3支试管相应标记菌名，分别加入2~3ml 对应管中的菌液，再加入VP试剂10-15滴，并用牙签挑入约0.51mg微量肌酸，振荡 试管，放在37℃恒温培养箱中保温15-30min后，若培养液呈红色，记录为阳性反应， 若不呈红色，则记为阴性。 ()MR试验 VP试验留下的培养液中，各加入2~3滴甲基红试剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养 液上层，若培养液上层变为红色，即为阳性反应，若仍为黄色，则为阴性反应。 五、实验报告 L,大肠杆菌和产气杆南VP试验和MR实验的结果。 3.（二） 细菌的生理生化反应（V.P. 试验、甲基红试验） 一、目的要求 了解细菌鉴定中常用的主要生理生化反应试验法及其原理。 二、实验材料 1. 菌种：大肠杆菌（E.coli）、产气杆菌(Enterobacter aerogenes) 2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基 3. 试剂：甲基红试剂，40%NaOH 溶液，肌酸 三、基本原理 大肠杆菌和产气杆菌均为革兰氏阴性杆菌，大肠杆菌是肠道寄生菌，产气杆菌广泛存在 自然界中，因此检查水时要将两者分开。 V.P.试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。 丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成 二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即 V.P 反应为阳性。产气 杆菌 V.P 反应为阳性。 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代 谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色（pH6.3）变 为红色（pH4.2）即甲基红反应为阳性。大肠杆菌甲基红反应为阳性。 四、操作步骤 (一) V.P.试验 1. 试管标记 取 3 支装有葡萄糖蛋白胨水培养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气杆菌和 空白对照。 2. 接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白不接菌。置 37℃恒 温箱中，培养 24~48h。 3. 观察记录 取出以上试管，振荡 2min，另取 3 支试管相应标记菌名，分别加入 2~3ml 对应管中的菌液，再加入 V.P.试剂 10~15 滴，并用牙签挑入约 0.5~1mg 微量肌酸，振荡 试管，放在 37℃恒温培养箱中保温 15~30min 后，若培养液呈红色，记录为阳性反应， 若不呈红色，则记为阴性。 (二) M.R 试验 V.P.试验留下的培养液中，各加入 2~3 滴甲基红试剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养 液上层，若培养液上层变为红色，即为阳性反应，若仍为黄色，则为阴性反应。 五、实验报告 1. 大肠杆菌和产气杆菌 V.P 试验和 M.R 实验的结果。 2. 在 V.P 反应中加入 NaOH 溶液的作用是什么？ 3. 还有哪些生理生化反应能用于鉴别大肠杆菌和产气杆菌