实验九微生物生理学实验 (一)酵母菌对糖类的发酵和对氮源的利用 一、目的要求 1,学习测定酵母菌对糖类发酵和对氨源利用的方法： 2.学习并掌捉微生物接种的无菌操作技术。 二、基本原理 酵母菌对各种糖类的发酵能力差别甚大，这是酵母菌分类鉴定的重要依据，也是酿造 工业中鉴别培养酵母和野生酵母的一种方法。由于酵母菌发酵糖类能生成乙醇和C0,因此 可以在加糖的培养基中培养酵母菌，通过观察有无气体生成来判断酵母菌能否发酵该糖。 不同的酵母菌，由于其体内酶系不同，对不同氮源物质的利用能力也不尽相同。了解 酵母菌对氮源物质的要求，不但有助于对酵母菌进行分类鉴定，而且对发酵培养基的设计也 可提供依据。在无氮的基础培养基中添加 中氨源物质作唯一氨源，并拉 种酵母菌进行培养。 根据酵母茵能否生长及生长的程度可以判断酵母菌对该氮源物质能否利用及利用的能力。 三、实验材料 1南种：酿酒酵母 2,培养基：糖发酵管（无碳基础培养基+2%待测糖，内含倒置杜氏小管）：氮源利用培养 基（酵母无氮基础培养基+0.5%待测氮源 其它：酒精灯，接种环等 四、操作步骤 1.酵母菌对氮源的利用 1)接种： 操作前，先用75%酒精擦手 b)取各种特测氮源培养基斜面和对照各1支，用75%酒精擦洗后，置于无菌工作台的试 管架上，然后开启无菌工作台，点燃酒精灯。 ©)取菌种管和待接种的培养基管各1支，握于左手的大拇指和其他四指之间，使斜面向上， 并处于水平位置。 )先将两支试管的塞子轻轻旋转一下，然后用右手的手指夹住试管塞的端部将其拔出，并 将试管口在酒精灯火焰上旋转加热 (试管塞不得任意放在操作 上或与其他物品相接 触，也不得用手握住其插入试管内的部分：试管口要一直置于酒精灯火焰的保护下) ©)将接种环由下至上在酒精灯火焰上加热后伸入菌种管内，先在试管内壁或未长菌苔的培 养基表面接触一下，使接种环充分冷却。然后用接种环在南苔上轻轻地接触，刮出少许 培养物，将接种环自菌种管内抽出（取菌时不要将原培养基带出，也不要茵量太大，以 免影响结果： 抽出时勿与管壁相碰。 也不要再通过火焰) )迅速将沾有菌种的接种环伸入培养基管内，在斜面上自下而上轻轻划直线即可（划线时 不要用力，不得将培养基表面划破)。 g将接种环抽出，在酒精灯火焰上灼烧试管口，塞上试管塞。 )将接种环在火焰上灼烧灭南后放回试管架上，然后将试管塞进一步塞紧，将己接种的培 养基管放回试管架，并取出另一支培养基管进行接种，直至将所有培养基管全部接种（操 也可同时取几支试管接种) 2)培养：将上述接种好的各试管置于25℃培养5-7天。实验九 微生物生理学实验 （一） 酵母菌对糖类的发酵和对氮源的利用 一、目的要求 1. 学习测定酵母菌对糖类发酵和对氮源利用的方法； 2. 学习并掌握微生物接种的无菌操作技术。 二、基本原理 酵母菌对各种糖类的发酵能力差别甚大，这是酵母菌分类鉴定的重要依据，也是酿造 工业中鉴别培养酵母和野生酵母的一种方法。由于酵母菌发酵糖类能生成乙醇和 CO2，因此 可以在加糖的培养基中培养酵母菌，通过观察有无气体生成来判断酵母菌能否发酵该糖。 不同的酵母菌，由于其体内酶系不同，对不同氮源物质的利用能力也不尽相同。了解 酵母菌对氮源物质的要求，不但有助于对酵母菌进行分类鉴定，而且对发酵培养基的设计也 可提供依据。在无氮的基础培养基中添加一种氮源物质作唯一氮源，并接种酵母菌进行培养。 根据酵母菌能否生长及生长的程度可以判断酵母菌对该氮源物质能否利用及利用的能力。 三、实验材料 1. 菌种：酿酒酵母 2. 培养基：糖发酵管（无碳基础培养基+2%待测糖，内含倒置杜氏小管）；氮源利用培养 基（酵母无氮基础培养基+0.5%待测氮源） 3. 其它：酒精灯，接种环等 四、操作步骤 1. 酵母菌对氮源的利用 1）接种： a) 操作前，先用 75%酒精擦手； b) 取各种待测氮源培养基斜面和对照各 1 支，用 75%酒精擦洗后，置于无菌工作台的试 管架上，然后开启无菌工作台，点燃酒精灯。 c) 取菌种管和待接种的培养基管各 1 支，握于左手的大拇指和其他四指之间，使斜面向上， 并处于水平位置。 d) 先将两支试管的塞子轻轻旋转一下，然后用右手的手指夹住试管塞的端部将其拔出，并 将试管口在酒精灯火焰上旋转加热（试管塞不得任意放在操作台上或与其他物品相接 触，也不得用手握住其插入试管内的部分；试管口要一直置于酒精灯火焰的保护下）。 e) 将接种环由下至上在酒精灯火焰上加热后伸入菌种管内，先在试管内壁或未长菌苔的培 养基表面接触一下，使接种环充分冷却。然后用接种环在菌苔上轻轻地接触，刮出少许 培养物，将接种环自菌种管内抽出（取菌时不要将原培养基带出，也不要菌量太大，以 免影响结果；抽出时勿与管壁相碰，也不要再通过火焰）。 f) 迅速将沾有菌种的接种环伸入培养基管内，在斜面上自下而上轻轻划直线即可（划线时 不要用力，不得将培养基表面划破）。 g) 将接种环抽出，在酒精灯火焰上灼烧试管口，塞上试管塞。 h) 将接种环在火焰上灼烧灭菌后放回试管架上，然后将试管塞进一步塞紧，将已接种的培 养基管放回试管架，并取出另一支培养基管进行接种，直至将所有培养基管全部接种（操 作熟练后也可同时取几支试管接种）。 2）培养：将上述接种好的各试管置于 25℃培养 5~7 天