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位点特异的重组和同源重组。依赖整合酶、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重 组。发生在同源序列间的重组称为同源重组,又称基本重组。 为研究基因的结构与功能,从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就 是基因克隆或分子克隆,又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括:目的基因的获取,克 隆基因载体的选择与改造,目的基因与载体的连接,重组DNA分子导人受体细胞,筛选出含感兴趣基 因的重组DNA转化细胞。可概括为:分、切、接、转、筛。限制性内切核酸酶是基因工程中的重要工 具酶,是一类识别DNA特异序列的内切核酸酶。获得含目的基因的转化子菌落后,再经扩增、分离重 组DNA,获得基因克隆。分离的克隆cDNA或基因与适当表达载体连接后可实现目的基因在E.coli或其 他表达体系的表达。重组DNA技术在疾病基因的发现,表达有药用价值的蛋白质,DNA诊断及疾病的 预防等方面具有广泛应用价值,促进了当代分子医学的诞生和发展。 1.重点内容 (1)自然界的基因转移和重组。 (2)重组DNA技术的相关概念及其基本原理。 2.难点内容 (1)基因重组。 (2)重组DNA技术基本原理。 三、学时安排 4学时 第十五章 细胞信息传递 一、目的要求 (一)掌握:1.信息分子(配体)和受体的概念、种类、结构与功能。 2.信息传递的主要途径。 (二)熟悉:信息物质以及受体作用的特点。 (三)了解:信息传递途径的相互联系与疾病的关系。 二、主要内容 信息传递体系包括:信息物质→与相应受体结合→信息转导→启动细胞内信使系统→生物学效 应。细胞间信息物质有蛋白质、激素、神经递质等。细胞内信息物质有无机离子(C2+)、脂类和 衍生物、环核苷酸及信号蛋白(如蛋白激酶)等。受体在细胞信息传递中起重要作用,按其存在部 位分为细胞膜受体与细胞内受体两大类。受体与配体结合的特点是:高度专一性、高度亲和性、可 饱和性及可逆性。 G蛋白即鸟苷酸结合蛋白,是细胞膜受体信息传递的重要偶联体,由α、B、Y三个亚基组成, 有非活化型和活化型两种构象,并可相互转变。膜受体介导的信息传递有5条主要途径:(1)cAMP 蛋白激酶途径。其中cAMP为第二信使。可激活PKA。(2)Ca2+-依赖性蛋白激酶(PKC)途径。IP3 DAG、Ca+是主要的第二信使。可激活PKC。上述这两条途径主要是绝大多数水溶性激素的作用途 径,调节物质代谢或基因表达。(3)cGMP-蛋白激酶途径。cGMP是第二信使。心钠素、一氧化氮通 过这条途径引起生物学效应。(4)酪氨酸蛋白激酶(TPK)途径。包括受体型TPK和胞浆非受体型 TPK。前者主要指某些细胞因子受体通过TPK-Rs-有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径。后者主要 指某些细胞因子(如干扰素),由胞浆内具有TPK活性的JAK进行信息传导,通过转录因子STAT影响位点特异的重组和同源重组。依赖整合酶、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重 组。发生在同源序列间的重组称为同源重组,又称基本重组。 为研究基因的结构与功能,从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就 是基因克隆或分子克隆,又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括:目的基因的获取,克 隆基因载体的选择与改造,目的基因与载体的连接,重组DNA分子导人受体细胞,筛选出含感兴趣基 因的重组DNA转化细胞。可概括为:分、切、接、转、筛。限制性内切核酸酶是基因工程中的重要工 具酶,是一类识别DNA特异序列的内切核酸酶。获得含目的基因的转化子菌落后,再经扩增、分离重 组DNA,获得基因克隆。分离的克隆cDNA或基因与适当表达载体连接后可实现目的基因在E.coli或其 他表达体系的表达。重组DNA技术在疾病基因的发现,表达有药用价值的蛋白质,DNA诊断及疾病的 预防等方面具有广泛应用价值,促进了当代分子医学的诞生和发展。 1.重点内容 (1)自然界的基因转移和重组。 (2)重组DNA技术的相关概念及其基本原理。 2.难点内容 (1)基因重组。 (2)重组DNA技术基本原理。 三、学时安排     4学时 第十五章 细胞信息传递 一、目的要求 (一)掌握:1.信息分子(配体)和受体的概念、种类、结构与功能。 2.信息传递的主要途径。 (二)熟悉:信息物质以及受体作用的特点。 (三)了解:信息传递途径的相互联系与疾病的关系。 二、主要内容 信息传递体系包括:信息物质→与相应受体结合→信息转导→启动细胞内信使系统→生物学效 应。细胞间信息物质有蛋白质、激素、神经递质等。细胞内信息物质有无机离子(Ca2+)、脂类和 衍生物、环核苷酸及信号蛋白(如蛋白激酶)等。受体在细胞信息传递中起重要作用,按其存在部 位分为细胞膜受体与细胞内受体两大类。受体与配体结合的特点是:高度专一性、高度亲和性、可 饱和性及可逆性。 G蛋白即鸟苷酸结合蛋白,是细胞膜受体信息传递的重要偶联体,由α、β、γ三个亚基组成, 有非活化型和活化型两种构象,并可相互转变。膜受体介导的信息传递有5条主要途径:(1)cAMP- 蛋白激酶途径。其中cAMP为第二信使。可激活PKA。(2)Ca2+-依赖性蛋白激酶(PKC)途径。IP3、 DAG、Ca2+是主要的第二信使。可激活PKC。上述这两条途径主要是绝大多数水溶性激素的作用途 径,调节物质代谢或基因表达。(3)cGMP-蛋白激酶途径。cGMP是第二信使。心钠素、一氧化氮通 过这条途径引起生物学效应。(4)酪氨酸蛋白激酶(TPK)途径。包括受体型TPK和胞浆非受体型 TPK。前者主要指某些细胞因子受体通过TPK-Ras-有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径。后者主要 指某些细胞因子(如干扰素),由胞浆内具有TPK活性的JAK进行信息传导,通过转录因子STAT影响
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