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使用易产气溶胶的设备时,要安装可收集气溶胶的安全箱等。设计用于基因重组菌 的培养装置时,不仅要考虑外部杂菌的侵入,还要防止重组菌的外漏。此外,培养 后的菌体分离、破碎等处理也必须在安全柜内进行,或是采用密闭型的设备。 二、基因工程细胞培养特点 前已述及,基因工程细胞培养过程与培养方式与天然细胞培养过程或方式基本 —致。但亦有其自身持点。实践表明,基因工程细胞工业化培养中,产物的产率往 往比实验室培养规模为低。其原因主要与基因工程细胞特点有关,首先基因工程细 胞的生长速率及表达率与其所载外源 DNA 的稳定性及产物分泌过程有关,其中重 组 DNA 的稳定性尤为重要,重组 DNA 在宿主内表达方式有两种,其一是游离表达 方式、其二是结合表达方式。因此,基因工程细胞培养过程,重组 DNA 的丢失方 式亦有两种,其一是细胞培养过程,由于回复突变或分配作用致使 DNA 丢失.称 为脱落性不稳定,其二是重组 DNA 中编码的结构基因在宿主内发生再重组过程产 生突变,不再表达目的产物,此称加结构性不稳定。其次为提高基因工程细胞表达 效率,需采取适当措施,提高重组 DNA 在宿主细胞内的拷贝数及促进表达产物自 细胞内向细胞外分泌。此外,基因工程细胞的原宿主通常是某些培养物质(如某种氨 基酸或维生素等)的缺陷型,有些基因工程细胞生产过程亦产生某些抑制细胞生长的 代谢物。由此,在培养工程中应考虑控制培养液营养成分及其浓度,同时采取措施, 消除抑制细胞生长的代谢物,以保证细胞正常生长。由此可见,在基因工程细胞培 养过程,除—般培养条件外,必需考虑基因工程细胞的自身特点,确定最佳培养条 件。 三、基因工程细胞的培养 前已述及,基因工程细胞的培养过程与一般需氧细胞培养基本一致,同时培养 方式亦无差异,可采用各种分批培养方式,亦可采用连续培养、半连续培养及透析 培养等方式。至于影响基因工程细胞培养的细胞生物量得率与产物量的因素及有关 参数。亦可参照普通细胞相应培养方式求得。 目前关于动植物基因工程细胞培养工程的研究刚刚起步,有待进—步发展。这 里仅对基因工程菌的营养控制、质粒稳定性、重组质粒拷贝数的控制及表达效率作 简单讨论。 1,底物浓度的控制 在基因工程茵培养过程,至少要遵循 PI 级物理防护的规定,因此必需进行菌体 的高密度培养。普通 E.coli 培养时最高干重菌体收率可达 12.5%,酿酒酵母可得
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