0.03ml 0.04ml 0.06ml 10%过硫酸胺|003m 0.04ml 0.05ml TEMED 0.003n 0.004m 0.005ml 0.006ml (6)聚合的分离胶上直接灌注浓缩胶,立即在浓缩胶溶液中插入干净的梳子。小心避免 混入气泡,再加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙,将凝胶垂直放置于室温下。 (7)在等待浓缩胶聚合时,可对样品进行处理,在样品中按1:1体积比加入样品处理液, 在100℃加热3分钟以使蛋白质变性。 样品处理液配方: 50mM Tris-HCI(pH l00 mM DTT(or5%巯基乙醇) 0.1%溴酚蓝 10%甘油 (8)浓缩胶聚合完全后(30分钟),小心移出梳子。把凝胶固定于电泳装置上,上下 槽各加入Tris-甘氨酸电极缓冲液。必须设法排出凝胶底部两玻璃板之间的气泡 ris甘氨酸电极缓冲液 25mM Tris 250mM甘氨酸(pH8.3) 0.1%SDS (9)按予定顺序加样,加样量通常为10~25μ1(1.5mm厚的胶)。 00将电泳装置与电源相接,凝胶上所加电压为8v/cm。当染料前沿进入分离胶后, 把电压提高到15v/cm,继续电泳直至溴酚蓝到达分离胶底部上方约lcm,然后关闭电源。 αD从电泳装置上卸下玻璃板,用刮勺撬开玻璃板。紧靠最左边一孔(第一槽)凝胶 下部切去一角以标注凝胶的方位 3.用考马斯亮蓝对SDS聚丙烯酰胺凝胶进行染色 经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品可用考马斯亮蓝R250染色。192 10% SDS 0.03ml 0.04ml 0.05ml 0.06ml 0.08ml 10%过硫酸胺 0.03ml 0.04ml 0.05ml 0.06ml 0.08ml TEMED 0.003ml 0.004ml 0.005ml 0.006ml 0.008ml ⑹聚合的分离胶上直接灌注浓缩胶,立即在浓缩胶溶液中插入干净的梳子。小心避免 混入气泡，再加入浓缩胶溶液以充满梳子之间的空隙，将凝胶垂直放置于室温下。 ⑺在等待浓缩胶聚合时，可对样品进行处理，在样品中按 1:1 体积比加入样品处理液， 在 100℃加热 3 分钟以使蛋白质变性。 样品处理液配方： 50mM Tris-HCl(pH 6.8) 100mM DTT(or 5% 巯基乙醇) 2% SDS 0.1% 溴酚蓝 10%甘油 ⑻ 浓缩胶聚合完全后（30 分钟），小心移出梳子。把凝胶固定于电泳装置上，上下 槽各加入 Tris-甘氨酸电极缓冲液。必须设法排出凝胶底部两玻璃板之间的气泡。 Tris-甘氨酸电极缓冲液： 25mM Tris 250mM 甘氨酸 (pH 8.3) 0.1% SDS ⑼ 按予定顺序加样，加样量通常为 10～25μl（1.5mm 厚的胶）。 ⑽ 将电泳装置与电源相接，凝胶上所加电压为 8V/cm。当染料前沿进入分离胶后， 把电压提高到 15V/cm，继续电泳直至溴酚蓝到达分离胶底部上方约 1cm，然后关闭电源。 ⑾ 从电泳装置上卸下玻璃板，用刮勺撬开玻璃板。紧靠最左边一孔（第一槽）凝胶 下部切去一角以标注凝胶的方位。 3．用考马斯亮蓝对 SDS 聚丙烯酰胺凝胶进行染色 经 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品可用考马斯亮蓝 R250 染色