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教师采用多媒体讲解,学生再动手操作。 6.考核要求 (1)掌握PCR反应的原理 (2)掌握PCR反应程序的编写 7.实验报告要求 (1)按要求撰写实验报告 (2)分析实验结果 实验四DNA的凝胶电泳 1.本次实验的目的和要求 学习和掌握DNA的凝胶电泳方法。 2.实验原理 带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳。DNA等生物大分子在一定的PH值条 件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中向相反电移动。 琼脂糖和聚丙烯酰胺作为支持介质的凝胶电泳应用最多,它们是分离,鉴定和纯化DNA 和RNA片段的主要方法。琼脂糖比聚丙烯酰胺的分辩率低,但其分离范围广,约2O0p~ 50kb的DNA通常在垂直水平装置上进行,聚丙烯酰胺分离小片段(5~500bp)的效果较 好,一般在垂直装置上进行。 3.需要的仪器及试剂 (1)仪器 移液器,电泳仪,电泳槽,凝胶成像系统 (2)试剂 琼脂糖,50×TAE,溴化乙锭,上样液 4.实验步骤 (1)用适明透胶将洗净,干燥的电泳凝胶床的两端开口封好。 (2)用电泳缓冲液在微波炉上溶解琼脂糖颗粒,熔化的琼脂糖溶液冷却至60C时,加入 溴化乙锭,其浓度为0.5 ul/mlI,充分混匀。 (3)在胶膜放置好梳子后,将温热凝胶倒入胶膜中,倒胶时避免产生气泡,胶厚度为3 5mm.教师采用多媒体讲解,学生再动手操作。 6.考核要求 (1)掌握 PCR 反应的原理 (2)掌握 PCR 反应程序的编写 7.实验报告要求 (1)按要求撰写实验报告 (2)分析实验结果 实验四 DNA 的凝胶电泳 1.本次实验的目的和要求 学习和掌握 DNA 的凝胶电泳方法。 2.实验原理 带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳。DNA 等生物大分子在一定的 PH 值条 件下,可以解离成带电荷的离子,在电场中向相反电移动。 琼脂糖和聚丙烯酰胺作为支持介质的凝胶电泳应用最多,它们是分离,鉴定和纯化 DNA 和 RNA 片段的主要方法。琼脂糖比聚丙烯酰胺的分辩率低,但其分离范围广,约 200bp~ 50kb 的 DNA 通常在垂直水平装置上进行,聚丙烯酰胺分离小片段(5~500bp)的效果较 好,一般在垂直装置上进行。 3.需要的仪器及试剂 (1)仪器 移液器,电泳仪,电泳槽,凝胶成像系统 (2)试剂 琼脂糖,50×TAE,溴化乙锭,上样液 4.实验步骤 (1)用适明透胶将洗净,干燥的电泳凝胶床的两端开口封好。 (2)用电泳缓冲液在微波炉上溶解琼脂糖颗粒,熔化的琼脂糖溶液冷却至 60℃时,加入 溴化乙锭,其浓度为0.5ul/ml,充分混匀。 (3)在胶膜放置好梳子后,将温热凝胶倒入胶膜中,倒胶时避免产生气泡,胶厚度为 3~ 5mm
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