(7)透明度：透明、半透明、不透明 (8)溶血性：B一溶血（完全溶血），a一溶血（不完全溶血），不溶血 根据菌落数量和特征，挑选可能的病原菌菌落进一步划线纯化1~2次后，将经纯化的可 能病原菌用于感染试验。 3·病原菌的确定 将从患病材料中分离的所有可能病原菌经纯化和扩大培养后分别进行人工感染实验。目前最 常用的人工感染接种方法有浸泡、口服和注射法等，究竟选用哪一种方法最合适，需要根据 不同的疾病类型和可能的侵入途径而定。如体表的病，可采用浸泡法（包括创伤浸泡）：体 内的疾病，可采用口服、注射法。由于绝大部分病原菌都是条件致病菌，因此在人工感染实 验时还要注意感染菌的用量，接种量过大，即使该菌并不是引起实验材料致病的病原菌，也 可能会因大量菌体裂解释放的大量内毒素而使感染生物死亡，为了量化感染菌的危害程度， 可以测定感染细菌对接种动物的半数致死量(LD50）,根据D50的大小来判断其致病 力的强弱。只有D50相对较低、感染引起的死亡与实验材料有相同症状、并且经回接实 验还能分离到相同的细菌时，才能确定所分离的细菌为引起实验材料致病的病原。 在感染实验时，感染对象要求是没有患病史的同种生物，在感染前要经过1~2周的暂 养，感染数量要30尾以上（至少要10尾以上）。必要时，还要将温度控制在适合疾病爆 发的水平。感染过程中要定时投饵和换水，同时安排合适的对照组。 4。病原菌的鉴定 分别观察病原菌的形态以及检测其各种生理生化指标，通过查阅伯杰氏手册确定病原菌的种 类：也可直接用细菌鉴定仪测定病原菌的种类。 (二)疫苗制备 1,病原菌的扩大培养与分离 液体培养：按配方配制2216配液体培养基，将培养基用三角烧瓶分装并盖上棉塞后置于 高压蒸汽锅内，121℃灭菌15~30min,冷却后于超净工作台内加入1nl左右预先制 （ 7 ）透明度：透明、半透明、不透明 （ 8 ）溶血性： β －溶血（完全溶血）， α －溶血（不完全溶血），不溶血 根据菌落数量和特征，挑选可能的病原菌菌落进一步划线纯化 1 ～ 2 次后，将经纯化的可 能病原菌用于感染试验。 3 ．病原菌的确定 将从患病材料中分离的所有可能病原菌经纯化和扩大培养后分别进行人工感染实验。目前最 常用的人工感染接种方法有浸泡、口服和注射法等，究竟选用哪一种方法最合适，需要根据 不同的疾病类型和可能的侵入途径而定。如体表的病，可采用浸泡法（包括创伤浸泡）；体 内的疾病，可采用口服、注射法。由于绝大部分病原菌都是条件致病菌，因此在人工感染实 验时还要注意感染菌的用量，接种量过大，即使该菌并不是引起实验材料致病的病原菌，也 可能会因大量菌体裂解释放的大量内毒素而使感染生物死亡，为了量化感染菌的危害程度， 可以测定感染细菌对接种动物的半数致死量（ LD 50 ），根据 LD 50 的大小来判断其致病 力的强弱。只有 LD 50 相对较低、感染引起的死亡与实验材料有相同症状、并且经回接实 验还能分离到相同的细菌时，才能确定所分离的细菌为引起实验材料致病的病原 。 在感染实验时，感染对象要求是 没有患病史的同种生物，在感染前要经过 1 ～ 2 周的暂 养，感染数量要 30 尾以上（至少要 10 尾以上）。必要时，还要将温度控制在适合疾病爆 发的水平 。感染过程中要 定时投饵和换水，同时安排合适的对照组。 4 ．病原菌的鉴定 分别观察病原菌的形态以及检测其各种生理生化指标，通过查阅伯杰氏手册确定病原菌的种 类；也可直接用细菌鉴定仪测定病原菌的种类。 （二）疫苗制备 1 ．病原菌的扩大培养与分离 液体培养：按配方配制 2216E 液体培养基，将培养基用 三角烧瓶分装并盖上棉塞后置 于 高压蒸汽锅内， 121 ℃ 灭菌 15 ～ 30min ，冷却后于超净工作台内加入 1ml 左右预先制