A液:0.mol/L柠檬酸。21.01gCHO·H0→1000ml CH2--COOH B液:0.1mol/L柠檬酸纳。29.4gNa3CH5O2·2HO→1000ml 用时,A:B=18.6:1.4混合即可 弱酸一弱酸盐缓冲体系PH=Pka-1g(C/C盐) 3.13-1g(C酸/C盐) 柠檬酸Pka=3.13Pka=4.76Pkas=6.40 如测2709蛋白酶,最适PH=9~11,则选用硼砂一氢氧化纳缓冲溶液(PH=10) A液:0.055mo1/LNa2BAO2·8H2O。19g→1000ml水溶液 B液:0.2mol/ L NaOH。8g→1000m1水溶液 使用时取A液50m1B液43m1+H20→200ml Na, BO 7H,0 == NaOH 4H3 BO3 H3 BO3 H20 = B(OH+ H 一元弱酸Ka=5.6×1010 弱酸一弱酸盐缓冲体系 PH=PKa-1g(C酸/C盐) =9.24-1g(C酸/C盐) 如测1398蛋白酶选用0.02mol/L的磷酸盐缓冲溶液 A液:0.2mol/ L NaH,PO4溶液。31.2 g NaH2PO4·2H20→1000ml B液:0.2mol/LNa2HPO1溶液。71.7gNa2HPO4·12H20→1000m1 A液28m1+B液72ml,+H20到1000m1,PH=7.2;A液16m1书液84ml,+H20到1000m1, PH=7.5。 弱酸一弱酸盐缓冲体系 PH=PKa-1g(C酸C盐) [H2P04 7.21-1 [HPO4= Ka2=6.17×10-8 四、操作手续 (一)制作标准曲线 为了确定光密度OD值与酪氨酸之间量的关系 1.配制100mg/m1酪氨酸标准溶液 分析纯酪氨酸105℃烘干至恒重。用直接法准确称取0.1000g于50m1小烧杯,用 0.1mol/L的HCL溶解并定容到100m1容量瓶中。→1ug/ml=1000mg/m1(保存在冰箱中) 移取10m1上述溶液,用0.1mol/L的HCL溶解并定容到00m1容量瓶中。→100g/ml 2.系列浓度的酪氨酸标准溶液配制 取干燥试管编号按下表操作 管号酪氨酸浓度|加100ug/ml酪氨酸的量(m1)加蒸馏水的量(m) 0123456 10 7 用5或10ml刻度移液管移取A 液：0.1mol/L 柠檬酸。21.01g C6H8O7·H2O → 1000ml CH2—COOH HO—C —COOH CH2—COOH B 液：0.1mol/L 柠檬酸纳。29.4gNa3C6H5O7·2H2O→ 1000ml 用时，A∶B=18.6∶1.4 混合即可。 弱酸—弱酸盐缓冲体系 PH=Pka1-lg（C 酸/C 盐） =3.13- lg（C 酸/C 盐） 柠檬酸 Pka1=3.13 Pka2 = 4.76 Pka3 =6.40 如测 2709 蛋白酶，最适 PH=9～11，则选用硼砂—氢氧化纳缓冲溶液(PH=10)。 A 液：0.055mol/L Na2B4O7 ·8 H2O 。19g → 1000ml 水溶液 B 液：0.2 mol/L NaOH。 8g → 1000ml 水溶液 使用时取 A 液 50ml B 液 43ml + H2O → 200ml Na2B4O7 + 7H2O === NaOH + 4H3BO3 H3BO3 + H2O === B(OH)4 - + H+ 一元弱酸 Ka=5.6×10-10 弱酸—弱酸盐缓冲体系 PH = PKa- lg（C 酸/C 盐） =9.24- lg（C 酸/C 盐） 如测 1398 蛋白酶选用 0.02mol/L 的磷酸盐缓冲溶液 A 液：0.2mol/L NaH2PO4 溶液。31.2g NaH2PO4·2H2O → 1000ml B 液：0.2mol/L Na2HPO4 溶液。71.7g Na2HPO4·12H2O → 1000ml A 液 28ml+B 液 72ml，+ H2O 到 1000ml，PH=7.2；A 液 16ml+B 液 84ml，+ H2O 到 1000ml， PH=7.5。 弱酸—弱酸盐缓冲体系 PH = PKa - lg（C 酸/C 盐） [H2PO4-] = 7.21-lg ———— [HPO4=] Ka2 = 6.17×10-8 四、操作手续 (一)制作标准曲线 为了确定光密度 OD 值与酪氨酸之间量的关系 1．配制 100mg/ml 酪氨酸标准溶液 分析纯酪氨酸 105℃烘干至恒重。用直接法准确称取 0.1000g 于 50ml 小烧杯，用 0.1mol/L 的 HCL 溶解并定容到 100ml 容量瓶中。→1μg/ml=1000mg/ml(保存在冰箱中)。 移取 10ml 上述溶液，用 0.1mol/L 的 HCL 溶解并定容到 100ml 容量瓶中。→100μg/ml。 2．系列浓度的酪氨酸标准溶液配制 取干燥试管编号按下表操作。 管号 酪氨酸浓度 （μg/ml） 加 100μg/ml 酪氨酸的量（ml） 加蒸馏水的量（ml） 0 0 0 10 1 10 1 9 2 20 2 8 3 30 3 7 4 40 4 6 5 50 5 5 6 60 6 4 用 5 或 10ml 刻度移液管移取