风泰山医学院 细胞生物学 3.实验方法与步骤 (1)倒置显微镜观察细胞，情况良好时即可传代 (2) 废弃培养波中加胰酶，消化至细胞松动，倒去胰酶 加Eagle培养液制成细胞悬液 (4) 细胞悬液计数，按细胞数多少传代 (5)补足培养液，37℃培养 4.实验结果与讨论 实验六细胞的冷冻 1,实验日的要求：热悉体外培养细胞的液氨冻存技术及操作步骤 2.实哈设各、仪器与用品 (1)器材：冻存瓶、高温消毒柜、培养箱、刻度离心管、离心机、安培瓶、液氮。 (2)试剂：1640培养基、胰蛋白酶、液氨 Hcla细胞或其它培养细胞。 3.实验方法和步骤 (1)准备工作 a,细胞冻存液的制备 。冻存液的处理 (2) 在无菌环境中倾去培养液，制备细胞悬液 3 在无菌状态下离心。 (4) 加入冷冻液。 (5)细胞计数 (6)将细胞暴液移入冷冻瓶放入小布袋中，并放入冰箱处理2小时 将小布袋悬于液氮罐的气相液氮中放置2小时，然后进入液氮 4.实验结果与讨论 (1)要做好冻存记录 (2)检查安培瓶是否封严。 实验七冷存细胞的复苏 1,实验目的要求：熟悉液氮冻存的体外培养细胞复苏技术及操作步绿。 2.实验设备、仪器与用品 (1)器材：培养箱、刻度离心管、离心机、安培瓶。 (2)试剂：1640挡养其、75%酒 :液氮冷冻的H©la细胞或其它培养细胞 3.实验方法和步 (1)从液氮能中迅速取出冷冻瓶立即投入到盛有37℃温水的有盖容器中，同时手摇。 (2)在无菌条件下加入新鲜培养液静置培养。 (3)换液培养 4.实验结果与讨论 实验八细胞融合 1.实验目的要求：了解细胞融合的基本方法