(6)石英砂。 四、操作方法和步骤 1.酶液的制备 按每克鲜叶加入3mLo.05 mol/L pH78磷酸钠缓冲液,加入少量石英砂,于冰浴中的硏钵内硏磨成匀浆 定容到5mL刻度离心管中,于8500r/min(10000g)冷冻离心30min,上清液即为SOD酶粗提液。 2.酶活力的测定 每个处理取8个洗净干燥好的微烧杯编号,按表1加入各试剂及酶液,反应系统总体积为3mL。其中4 8号杯中磷酸钠缓冲液量和酶液量可根据试验材料中酶液浓度及酶活力进行调整(如酶液浓度大、活性强时, 酶用量适当减少)。 各试剂全部加入后,充分混匀,取1号微烧杯置于暗处,作为空白对照,比色时调零用。其余7个微烧杯 均放在温度为25℃,光强为4500Lux的光照箱内(安装有3根20W的日光灯管)照光15min,然后立即遮光 终止反应。在560m波长下以1号杯液调零,测定各杯液光密度并记录结果。以2、3号杯液光密度的平均值 作为抑制NBT光还原率100%,根据其他各杯液的光密度分别计算出不同酶液量的各反应系统中抑制NBT光 还原的相对百分率。以酶液用量为横坐标,以抑制NBT光还原相对百分率为纵坐标,作出二者相关曲线。找 出50%抑制率的酶液量(μL)作为一个酶活力单位(U) 表1反应系统中各试剂及酶液的加入量(mL) 试剂(5) 试剂(2) 试剂(3) 酶液 试剂(4) 0.9 0.3 0.3 0.10 7 0.3 .3 3（6）石英砂。 四、操作方法和步骤 1．酶液的制备 按每克鲜叶加入 3mL 0.05 mol/L pH7.8 磷酸钠缓冲液，加入少量石英砂，于冰浴中的研钵内研磨成匀浆， 定容到 5mL 刻度离心管中，于 8 500 r/min（10 000g）冷冻离心 30min，上清液即为 SOD 酶粗提液。 2．酶活力的测定 每个处理取 8 个洗净干燥好的微烧杯编号，按表 1 加入各试剂及酶液，反应系统总体积为 3mL。其中 4～ 8 号杯中磷酸钠缓冲液量和酶液量可根据试验材料中酶液浓度及酶活力进行调整（如酶液浓度大、活性强时， 酶用量适当减少）。 各试剂全部加入后，充分混匀，取 1 号微烧杯置于暗处，作为空白对照，比色时调零用。其余 7 个微烧杯 均放在温度为 25℃，光强为 4 500Lux 的光照箱内（安装有 3 根 20W 的日光灯管）照光 15min，然后立即遮光 终止反应。在 560nm 波长下以 1 号杯液调零，测定各杯液光密度并记录结果。以 2、3 号杯液光密度的平均值 作为抑制 NBT 光还原率 100％，根据其他各杯液的光密度分别计算出不同酶液量的各反应系统中抑制 NBT 光 还原的相对百分率。以酶液用量为横坐标，以抑制 NBT 光还原相对百分率为纵坐标，作出二者相关曲线。找 出 50％抑制率的酶液量（μL）作为一个酶活力单位（U）。 表 1 反应系统中各试剂及酶液的加入量（mL） 试 剂 杯 号 试剂（5） 试剂（2） 试剂（3） 酶 液 试剂（4） 1 0.9 1.5 0.3 0 0.3 2 0.9 1.5 0.3 0 0.3 3 0.9 1.5 0.3 0 0.3 4 0.85 1.5 0.3 0.05 0.3 5 0.80 1.5 0.3 0.10 0.3 6 0.75 1.5 0.3 0.15 0.3 7 0.70 1.5 0.3 0.20 0.3 8 0.65 1.5 0.3 0.25 0.3