第一部分细菌学实验方法 细菌是单细胞原核生物,体积小、半透明,且种类繁多、适应环境能力强、繁殖快、代 谢活泼,易发生变异和产生耐药性。病原性细菌能产生内、外毒素及其他侵袭力物质,引起 人和动物的感染性疾病。针对对细菌生物学特性已经建立了一系列的检测和研究方法,基本 的研究和检测方法包括细菌的染色和形态学观察、人工培养、生化反应、致病物质检测、遗 传变异硏究、动物实验、药物敏感试验、免疫应答等。细菌学检测通常包括査菌和査抗体两 个方面。通过第一部分八组实验方法的训练,学生可基本掌握临床细菌学检查的常用方法 实验一细菌的染色检查法 细菌为无色半透明,未经染色不易观察其形态和结构,需经染色,显微镜放大后才清晰 可见。对细菌进行染色和观察,首先需要将临床标本或待检的细菌培养物制备成涂片,再经 相应的染色法染色后,于光学显微镜下观察。 染色方法有单染和复染两种,前者应用一种染料使细菌着色,用以观察细菌的大小、形 态和排列;后者用2种或2种以上的染料,有助于鉴别细菌,故又称鉴别染色法。常用的单 染法有美蓝和复红染色,复染法有革兰染色法和抗酸染色法。此外,还有对细菌的芽胞、鞭 毛、荚膜、细胞壁等特殊结构的特殊染色法。 细菌涂片的制作 要进行细菌染色,首先需作涂片,细菌涂片的制作分涂片、干燥和固定三个步骤。 (一)涂片 1.取清洁无油载片一张,在其中央加一滴生理盐水,注意生理盐水越少越好,因为生 理盐水加多了会徒劳的延长图片的烘干时间。 2.将接种环用火焰烧红灭菌,待冷却后自琼脂斜面上取细菌少许,混于盐水滴中,轻 轻涂抹成直径约1cm大小的均匀悬液,然后将接种环烧红灭菌。制作涂片时所取的菌量不宜 过多,以免涂抹不均使细菌聚集成团,影响结果观察。若取液体标本(如肉汤培养物、脓液、 痰液等)作涂片时,可不加生理盐水而直接取标本涂片。 如用一张玻片同时做几种细菌涂片时,可用蜡笔将玻片分为数格,做好标记再进行涂片, 以免混淆。 3.接种环的灭菌和取菌法(图1-1) 灭菌:接种环在取菌前后,其金属丝部分必须用火焰烧红灭菌。方法是右手拿接种环, 将接种环垂直或15°角放在煤气灯的外焰中烧灼灭菌,待金属丝烧红后,斜执接种环将金 属柄缓慢通过火焰灭菌。切记未经灭菌的接种环不能取菌,取菌后的接种环必须灭菌后才能1 第一部分 细菌学实验方法 细菌是单细胞原核生物，体积小、半透明，且种类繁多、适应环境能力强、繁殖快、代 谢活泼，易发生变异和产生耐药性。病原性细菌能产生内、外毒素及其他侵袭力物质，引起 人和动物的感染性疾病。针对对细菌生物学特性已经建立了一系列的检测和研究方法，基本 的研究和检测方法包括细菌的染色和形态学观察、人工培养、生化反应、致病物质检测、遗 传变异研究、动物实验、药物敏感试验、免疫应答等。细菌学检测通常包括查菌和查抗体两 个方面。通过第一部分八组实验方法的训练，学生可基本掌握临床细菌学检查的常用方法。 实验一 细菌的染色检查法 细菌为无色半透明，未经染色不易观察其形态和结构，需经染色，显微镜放大后才清晰 可见。 对细菌进行染色和观察,首先需要将临床标本或待检的细菌培养物制备成涂片，再经 相应的染色法染色后，于光学显微镜下观察。 染色方法有单染和复染两种，前者应用一种染料使细菌着色，用以观察细菌的大小、形 态和排列；后者用 2 种或 2 种以上的染料，有助于鉴别细菌，故又称鉴别染色法。常用的单 染法有美蓝和复红染色，复染法有革兰染色法和抗酸染色法。此外，还有对细菌的芽胞、鞭 毛、荚膜、细胞壁等特殊结构的特殊染色法。 一、细菌涂片的制作 要进行细菌染色，首先需作涂片，细菌涂片的制作分涂片、干燥和固定三个步骤。 （一）涂片 1．取清洁无油载片一张，在其中央加一滴生理盐水，注意生理盐水越少越好，因为生 理盐水加多了会徒劳的延长图片的烘干时间。 2．将接种环用火焰烧红灭菌，待冷却后自琼脂斜面上取细菌少许 ，混于盐水滴中，轻 轻涂抹成直径约 1cm 大小的均匀悬液，然后将接种环烧红灭菌。制作涂片时所取的菌量不宜 过多，以免涂抹不均使细菌聚集成团，影响结果观察。若取液体标本（如肉汤培养物、脓液、 痰液等）作涂片时，可不加生理盐水而直接取标本涂片。 如用一张玻片同时做几种细菌涂片时，可用蜡笔将玻片分为数格，做好标记再进行涂片， 以免混淆。 3．接种环的灭菌和取菌法（图 1-1） 灭菌：接种环在取菌前后，其金属丝部分必须用火焰烧红灭菌。方法是右手拿接种环， 将接种环垂直或 15°角放在煤气灯的外焰中烧灼灭菌，待金属丝烧红后，斜执接种环将金 属柄缓慢通过火焰灭菌。切记未经灭菌的接种环不能取菌，取菌后的接种环必须灭菌后才能