微生物M时，应用选择培养基，在培养基中添加植物油作为唯一碳源。(2)培养基 灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)过程一的接种方法是平板划线法，可 以分离微生物，但不能用于计数。过程二的接种方法是稀释涂布平板法，此方法计 数的微生物M的数目小于实际活菌数。接种后应将培养皿倒置，防止水珠落下 污染培养基。 25.(10分)下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌并计数的实验，请回答下列 问题。 [实验原理]农田的表层土壤中自生固氮菌的数量比较多，所以用表层土壤制成稀 泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁 殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。 [材料用具]农田的表层土壤、配制无氮培养基和牛肉膏蛋白胨培养基的材料 盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90mL 无菌水的锥形瓶、恒温箱等。 (1)儿方法步骤] ①培养基的制备：分别配制无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，倒平板应在 操作。 ②制备土壤稀释液：取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 用无菌吸管吸取上清液 mL,转至盛有 mL无菌水的试管中，依 次稀释到1×107稀释度。 ③涂布平板操作按照由1×107~1×103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行涂布 平板操作。每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布 个平板，牛肉膏蛋白胨 培养基涂布 个平板。 ④培养：放入恒温箱内，在30~37℃下培养1~2d。 ⑤计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数为 的平板进行计数。如果在 稀释倍数为1×105的平板上测定的菌落数平均值为50，则每克样品中的细菌数是 个。 (2)儿预期结果]相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 (填“多于” 或“少于)无氮培养基上的数目。原因是无氮培养基上 而牛肉 膏蛋白胨培养基上 答案(1)酒精灯火焰附近193130-300 5×107 (2)多于只有土壤中的自生固氮菌能生长繁殖几乎允许土壤中所有微生物生 长 解析(1)在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌的污染。为了保证结果准确，一般 每个稀释度下涂布3个或3个以上平板，选择菌落数为30~300的平板进行计数，微生物 M 时,应用选择培养基,在培养基中添加植物油作为唯一碳源。(2)培养基 灭菌采用的最适方法是高压蒸汽灭菌法。(3)过程一的接种方法是平板划线法,可 以分离微生物,但不能用于计数。过程二的接种方法是稀释涂布平板法,此方法计 数的微生物 M 的数目小于实际活菌数。接种后应将培养皿倒置,防止水珠落下 污染培养基。 25.(10 分)下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌并计数的实验,请回答下列 问题。 [实验原理] 农田的表层土壤中自生固氮菌的数量比较多,所以用表层土壤制成稀 泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁 殖。用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离。 [材料用具] 农田的表层土壤、配制无氮培养基和牛肉膏蛋白胨培养基的材料、 盛有 9 mL 无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶、恒温箱等。 (1)[方法步骤] ①培养基的制备:分别配制无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基,倒平板应在 操作。 ②制备土壤稀释液:取土样 10 g 加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。 用无菌吸管吸取上清液 mL,转至盛有 mL 无菌水的试管中,依 次稀释到 1×107 稀释度。 ③涂布平板操作:按照由 1×107 ~1×103 稀释度的顺序分别吸取 0.1 mL 进行涂布 平板操作。每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布 个平板,牛肉膏蛋白胨 培养基涂布 个平板。 ④培养:放入恒温箱内,在 30~37 ℃下培养 1~2 d。 ⑤计数:当菌落数目稳定时,选取菌落数为 的平板进行计数。如果在 稀释倍数为 1×105 的平板上测定的菌落数平均值为 50,则每克样品中的细菌数是 个。 (2)[预期结果]相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 (填“多于” 或“少于”)无氮培养基上的数目。原因是无氮培养基上 ,而牛肉 膏蛋白胨培养基上 。 答案:(1)酒精灯火焰附近 1 9 3 1 30~300 5×107 (2)多于 只有土壤中的自生固氮菌能生长繁殖 几乎允许土壤中所有微生物生 长 解析:(1)在酒精灯火焰旁倒平板,可以减少杂菌的污染。为了保证结果准确,一般 每个稀释度下涂布 3 个或 3 个以上平板,选择菌落数为 30~300 的平板进行计数