华中农业大学创建国家精品课程—细胞工程学文本教案(第七章) 主讲教师:柳俊博士、教授 结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合;另外,PEG能增加类脂膜的流动 性,也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能 ●融合技术要点 融合液 y混合静止1mi 选择 P 加入PEG 融合 培养 加入稀释液 稀释 加入培养基↓|洗涤 融合液:CaCl2·2H2O8~10mmol KH2PO4 0.7mmol 甘露醇或山梨醇0.5~1.0mol pH5.6 诱导液:融合液+PEG20~45% 稀释液:A液(g/100ml)pH6.0B液(g100m)pH10.5 葡萄糖721 甘氨酸0.375 CaCl22H200.79 Naoh 0.169 DMSO 10m 电融合法 ●与PEG融合比较起来,电融合有三大优点:一是不存在对细胞的毒害问题;二是融合效 率高;三是融合技术操作简便 电融合仪的结构特点:一是交变电场部分;一是高频直流电击部分 ●电融合的基本过程: 细胞膜的接触:当原生质体置于电导率很低的溶液中时,电场通电后,电流即通过原生 质体而不是通过溶液,其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子,从而使原生质体 紧密接触排列成串;华中农业大学创建国家精品课程——细胞工程学 文本教案(第七章) 主讲教师：柳俊博士、教授 结果是使原生质体发生粘连进而促使原生质体的融合；另外，PEG 能增加类脂膜的流动 性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。  融合技术要点： 融合液：CaCl2·2H2O 8~10mmol KH2PO4 0.7mmol 甘露醇或山梨醇 0.5~1.0mol pH 5.6 诱导液：融合液＋PEG 20～45％ 稀释液：A 液（g/100ml）pH6.0 B 液（g/100ml）pH10.5 葡萄糖 7.21 甘氨酸 0.375 CaCl2·2H2O 0.79 NaOH 0.169 DMSO 10ml 2．电融合法  与 PEG 融合比较起来，电融合有三大优点：一是不存在对细胞的毒害问题；二是融合效 率高；三是融合技术操作简便。  电融合仪的结构特点：一是交变电场部分；一是高频直流电击部分。  电融合的基本过程： 细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生 质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体 紧密接触排列成串； P 1 P 2 P 1 P 2 混合静止 1min. 融 合 融合液 加入 PEG 稀 释 洗 涤 加入稀释液 加入培养基 培 养 选 择