全交换量大于3毫摩尔/克干树脂,粉末型100~200目 3.IM甲酸:214ml88%甲酸定容至500ml。 4.IM甲酸钠:34.15g纯甲酸钠(注意结晶水问题)用蒸餾水溶解,定容至500ml 5.0.3MKOH:1.68gKOH用蒸餾水溶解定容至100ml。 6.2M过氯酸HCO4:17m过氯酸(70~72%)定容至100ml 7. 2 M NaOH(50ml), 0.5 MNaOH (100ml) 8. IM HCI(100ml) 9.1%AgNO3溶液 器材: 1.层析柱 2.梯度洗脱器,电磁搅拌器 3.恒流泵 4.自动部分收集器 5.酸度计 6.紫外分光光度计 7.旋涡混合器 8.核酸蛋白检测仪 9.台式离心机 四、操作步骤 1.RNA的碱水解 称取20mg酵母RNA,置于刻度离心试管中,加2m新配制的03MKOH用细玻 璃棒搅拌溶解,于37℃水浴中保温水解20小时。然后用2 MHCIO4(过氯酸)调水解 液pH至2以下(要少量多次,只需几滴即可)。由于核苷酸在过酸的条件下易脱嘌呤, 所以滴加HCIO4时需用旋涡混合器迅速搅拌,防止局部过酸,再以4000转/分的转速离 心15分钟,置冰浴中10分钟,以沉淀完全。将清液倒入另一刻度试管中,用2 M Naoh 逐滴将清液pH值调至8~9,作上样样品液备用。样品液上柱前,取O.ml稀释到500 倍,测定其在260mm波长处的光吸收值,用以最后计算离子交换柱层析的回收率。 2.高子交换树脂的预处理 取201×8粉末型强碱型阴离子交换树脂8克(湿),先用蒸馏水浸泡2小时,浮选 除去细小颗粒,同时用减压法除去树脂中存留的气泡,然后用四倍树脂量的O.5 M NaOH 218218 全交换量大于 3 毫摩尔/克干树脂，粉末型 100~200 目。 3. 1M 甲酸：21.4ml 88%甲酸定容至 500ml。 4. 1M 甲酸钠：34.15g 纯甲酸钠（注意结晶水问题）用蒸餾水溶解，定容至 500ml。 5. 0.3 M KOH: 1.68g KOH 用蒸餾水溶解定容至 100ml。 6. 2 M 过氯酸 HClO4：17ml 过氯酸( 70~72 % )定容至 100ml。 7. 2 M NaOH (50ml)，0.5 M NaOH (100ml)。 8. 1M HCl（100ml）。 9. 1% AgNO3 溶液。 器材： 1. 层析柱 2. 梯度洗脱器，电磁搅拌器 3. 恒流泵 4. 自动部分收集器 5. 酸度计 6. 紫外分光光度计 7. 旋涡混合器 8. 核酸蛋白检测仪 9. 台式离心机 四、操作步骤 1. RNA 的碱水解： 称取 20mg 酵母 RNA，置于刻度离心试管中，加 2ml 新配制的 0.3 M KOH, 用细玻 璃棒搅拌溶解，于 37℃水浴中保温水解 20 小时。然后用 2M HClO4（过氯酸）调水解 液 pH 至 2 以下（要少量多次，只需几滴即可）。由于核苷酸在过酸的条件下易脱嘌呤， 所以滴加 HClO4 时需用旋涡混合器迅速搅拌，防止局部过酸，再以 4000 转/分的转速离 心 15 分钟，置冰浴中 10 分钟，以沉淀完全。将清液倒入另一刻度试管中，用 2 M NaOH 逐滴将清液 pH 值调至 8～9，作上样样品液备用。样品液上柱前，取 0.1ml 稀释到 500 倍，测定其在 260nm 波长处的光吸收值，用以最后计算离子交换柱层析的回收率。 2. 离子交换树脂的预处理： 取 201×8 粉末型强碱型阴离子交换树脂 8 克（湿），先用蒸馏水浸泡 2 小时，浮选 除去细小颗粒，同时用减压法除去树脂中存留的气泡，然后用四倍树脂量的 0.5M NaOH