溶液浸泡1小时,除去树脂中的碱溶性杂质。用去离子水洗至近中性后,再用四倍量IM HCl浸泡半小时,以除去树脂中酸溶性杂质。接着用蒸馏水洗至中性(可以上柱洗), 此时阴离子交换树脂为氯型。 3.高子交换层析柱的装柱方法: 离子交换层析柱可使用内径约lcm、长10cm的层析柱,柱下端有烧结上的垂熔滤 板,柱上端使用橡皮塞,塞子中间打一小孔。紧紧插入一根细聚乙烯管,层析柱夹在铁 架台上,调成垂直,柱下端细胶管用螺旋夹夹紧,向柱内加入蒸馏水至2/3柱高,再用 滴管将经过预处理的离子交换树脂加入柱内,使树脂自由沉降至柱底,放松螺旋夹 使蒸馏水缓慢流出,再继续加入树脂,使树脂最后沉降的高度约为6-7cm。注意在装 柱和以后使用层析柱的过程中,切勿干柱,树脂不能分层,树脂面以上要保持一定高度 的液面(不能太高,约1cm),以防气泡进入树脂内部,影响分离效果。 4.树脂的转型处理: 树脂的转型处理就是使树脂带上洗脱时所需要的离子。本实验需要将阴离子交换树 脂由氯型转变为甲酸型,先用200mlM甲酸钠洗柱,用1%AgNO3检查柱流出液,直 至不出现白色AgCl沉淀为止。然后改用约200ml0.2M甲酸继续洗柱,测定流出液的 A260≤0.020为止。最后用蒸馏水洗柱,直至流出液的pH值接近中性(或与蒸馏水的 pH相同) 5.加入样品并淋洗除去不被树脂吸附的组分: 加样就是将RNA碱水解产物转移到离子交换层析柱内,使其被离子交换树脂吸附。 先将柱内液体用滴管轻轻吸去,使液面下降到刚接近树脂表面。旋紧下端螺旋夹,用滴 管准确移取l0nRNA碱水解样品液,沿柱壁小心加到树脂表面,然后松开下端螺旋 夹,使样品液面下降至树脂表面,接着用滴管加入少量蒸馏水,当水面降至树脂表面时, 再用约20om蒸馏水洗柱,将不被阴离子交换树脂吸附的嘌呤及嘧啶碱基,核苷等杂质 洗下来。检査流出液在260nm波长处的吸光度,直至低于0.020为止。关恒流泵,旋紧 柱下端螺旋夹 6.梯度洗脱: 在梯度洗脱器的混合瓶内加入300ml蒸馏水,贮液瓶中加入300mL0.20M甲酸· 020M甲酸钠混合液(注意:梯度洗脱器底部的连通管要事先充满蒸馏水,赶尽气泡) 洗脱器出口与恒流泵入口用细塑料管相连,打开两瓶之间的连通伐和出口伐,打开电磁 搅拌器,松开柱下端螺旋夹,开启恒流泵,控制流速为5ml/管/10分,开启部份收219 溶液浸泡 1 小时，除去树脂中的碱溶性杂质。用去离子水洗至近中性后，再用四倍量 1M HCl 浸泡半小时，以除去树脂中酸溶性杂质。接着用蒸馏水洗至中性（可以上柱洗）， 此时阴离子交换树脂为氯型。 3. 离子交换层析柱的装柱方法： 离子交换层析柱可使用内径约 1cm、长 10 cm 的层析柱，柱下端有烧结上的垂熔滤 板，柱上端使用橡皮塞，塞子中间打一小孔。紧紧插入一根细聚乙烯管，层析柱夹在铁 架台上，调成垂直，柱下端细胶管用螺旋夹夹紧，向柱内加入蒸馏水至 2/3 柱高，再用 滴管将经过预 处理的离子交换树脂加入柱内，使树脂自由沉降至柱底，放松螺旋夹， 使 蒸馏水缓慢流出，再继续加入树脂，使树脂最后沉降的高度约为 6~7cm.。注意在装 柱和以后使用层析柱的过程中，切勿干柱，树脂不能分层，树脂面以上要保持一定高度 的液面（不能太高，约 1cm），以防气泡进入树脂内部，影响分离效果。 4. 树脂的转型处理： 树脂的转型处理就是使树脂带上洗脱时所需要的离子。本实验需要将阴离子交换树 脂由氯型转变为甲酸型，先用 200ml 1M 甲酸钠洗柱，用 1%AgNO3 检查柱流出液，直 至不出现白色 AgCl 沉淀为止。然后改用约 200ml 0.2M 甲酸继续洗柱，测定流出液的 A260 ≤ 0.020 为止。最后用蒸馏水洗柱，直至流出液的 pH 值接近中性（或与蒸馏水的 pH 相同）。 5. 加入样品并淋洗除去不被树脂吸附的组分： 加样就是将 RNA 碱水解产物转移到离子交换层析柱内，使其被离子交换树脂吸附。 先将柱内液体用滴管轻轻吸去，使液面下降到刚接近树脂表面。旋紧下端螺旋夹，用滴 管准确移取 1.0 ml RNA 碱水解样品液，沿柱壁小心加到树脂表面，然后松开下端螺旋 夹，使样品液面下降至树脂表面，接着用滴管加入少量蒸馏水，当水面降至树脂表面时， 再用约 200ml 蒸馏水洗柱，将不被阴离子交换树脂吸附的嘌呤及嘧啶碱基，核苷等杂质 洗下来。检查流出液在 260nm 波长处的吸光度，直至低于 0.020 为止。关恒流泵，旋紧 柱下端螺旋夹。 6. 梯度洗脱： 在梯度洗脱器的混合瓶内加入 300ml 蒸馏水，贮液瓶中加入 300ml 0.20M 甲酸— 0.20M 甲酸钠混合液（注意：梯度洗脱器底部的连通管要事先充满蒸馏水，赶尽气泡）。 洗脱器出口与恒流泵入口用细塑料管相连，打开两瓶之间的连通伐和出口伐，打开电磁 搅拌器，松开柱下端螺旋夹，开启恒流泵，控制 流速为 5ml / 管 / 10 分，开启部份收