离和鉴定。 早期的等电聚焦电泳是垂直管式的,其特点是体系是封闭的,不与空气接触,可防 止样品氧化。近年来,又发展了超薄层水平板式等电聚焦电泳。此法的优点是加样数量 多,节省两性电解质,电泳后固定、染色、干燥都十分迅速简便,其最大优点是防止了 电极液的电渗作用而引起正负两极pH梯度的漂变 测定pH梯度的方法有四种: 将胶条切成小块,用水浸泡后,用精密pH试纸或进口的细长pH复合电极测定 pH值,然后作图。 2.用表面pH微电极直接测定胶条各部分的pH值,然后作图。 3.用一套已知不同的pl值的蛋白质作为标准,测定pH梯度的标准曲线 4.将胶条于一70℃冰冻后切成1mm的薄片,加入0.5m001MKCl,用微电极 测其pH 三、仪器和用具 1.电泳仪 2.垂直管式园盘电泳槽一套 3.注射器与针头 4.移液管:10ml、5ml、2ml、lml、0.lml 5.小烧杯若干 6.培养皿一套 7.直尺 8.小刀 9.精密pH试纸和带细长复合pH电极的pH计 10.塑料薄膜和橡皮筋 四、试剂 丙烯酰胺 2.甲叉双丙烯酰胺 3.两性电解质 Ampholine(40%,pH3.5~9.5) 4.过硫酸胺(催化剂) 5. TEMED(四甲基乙二胺)(加速剂) 6.磷酸 7. NaOH 8三氯乙酸(TCA) 五、溶液配制 丙烯酰胺贮液(30%丙烯酰胺,交联度2.6%):;30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙 烯酰胺溶于H2O,定容至100ml,滤去不溶物后存于棕色瓶,4℃可保存数月。(全班公 用)(另一配方为291g丙烯酰胺和0.9g甲叉双丙烯酰胺溶于HO,定容至100ml,交 联度为3.0%)。 2.两性电解质 Amphline(40%)的加入量为:50μ/ml胶液。 3.过硫酸胺:配成 Img/ml的浓度,当天配制,配100m全班公用。胶液中的加入185 离和鉴定。 早期的等电聚焦电泳是垂直管式的，其特点是体系是封闭的，不与空气接触，可防 止样品氧化。近年来，又发展了超薄层水平板式等电聚焦电泳。此法的优点是加样数量 多，节省两性电解质，电泳后固定、染色、干燥都十分迅速简便，其最大优点是防止了 电极液的电渗作用而引起正负两极 pH 梯度的漂变。 测定 pH 梯度的方法有四种： 1. 将胶条切成小块，用水浸泡后，用精密 pH 试纸或进口的细长 pH 复合电极测定 pH 值，然后作图。 2. 用表面 pH 微电极直接测定胶条各部分的 pH 值，然后作图。 3. 用一套已知不同的 pI 值的蛋白质作为标准，测定 pH 梯度的标准曲线。 4. 将胶条于－70℃冰冻后切成 1mm 的薄片，加入 0.5ml 0.01M KCl，用微电极 测其 pH。 三、仪器和用具 1. 电泳仪 2. 垂直管式园盘电泳槽一套 3. 注射器与针头 4. 移液管：10ml、5ml、2ml、1ml、0.1ml 5. 小烧杯若干 6. 培养皿一套 7. 直尺 8. 小刀 9. 精密 pH 试纸和带细长复合 pH 电极的 pH 计 10. 塑料薄膜和橡皮筋 四、试剂 1. 丙烯酰胺 2. 甲叉双丙烯酰胺 3. 两性电解质 Ampholine（40%，pH3.5~9.5） 4. 过硫酸胺（催化剂） 5. TEMED（四甲基乙二胺）（加速剂） 6. 磷酸 7. NaOH 8. 三氯乙酸（TCA） 五、溶液配制 1. 丙烯酰胺贮液（30%丙烯酰胺，交联度 2.6%）：，30g 丙烯酰胺和 0.8g 甲叉双丙 烯酰胺溶于 H2O，定容至 100ml，滤去不溶物后存于棕色瓶，4℃可保存数月。（全班公 用）（另一配方为 29.1g 丙烯酰胺和 0.9g 甲叉双丙烯酰胺溶于 H2O，定容至 100ml，交 联度为 3.0%）。 2. 两性电解质 Amphline（40%）的加入量为：50l /ml 胶液。 3. 过硫酸胺：配成 1mg/ml 的浓度，当天配制，配 100ml 全班公用。胶液中的加入